hrvatski

USPOREDBA RAZINE MONOAMINA U MOZGU GUŠTERICA Podarcis siculus I Podarcis melisellensis METODOM TEKUĆINSKE KROMATOGRAFIJE VISOKE UČINKOVITOSTI

Terenska i laboratorijska istraživanja pokazala su da primorska gušterica (Podarcis siculus) kompetitivno isključuje kršku guštericu (Podarcis melisellensis), osobito na malim otocima. U istraživanju populacija divljih životinja, osim veličine i prehrane, ponašanje se također mora uzeti u obzir kao faktor koji ima velik utjecaj na zauzimanje teritorija. Istraživanje razine neurotransmitera u mozgu nužno je za bolje razumijevanje regulacije ponašanja. Serotonin, dopamin, noradrenalin i adrenalin su monoaminski neurotransmiteri koji određuju afektivno ponašanje, a razlike u njihovoj razini mogu biti jedan od uzroka različitog ponašanja vrsta. U ovom istraživanju izmjerili smo razinu serotonina, dopamina te noradrenalina i adrenalina u mozgu vrsta P. melisellensis i P. siculus tekućinskom kromatografijom visoke djelotvornosti (HPLC) s UV/VIS detekcijom. Ukupno je prikupljeno 36 mozgova vrsta P. melisellensis i P. siculus, uključujući oba spola. Uzorci mozgova homogenizirani su ultrazvučnim homogenizatorom u 4 volumena deproteinizacijske otopine i centrifugirani dva puta tijekom 20 minuta na 23390 x g i 4 °C. Uzorci su analizirani HPLC-om reverzne faze, gdje je kolona Kromasil 100-5-C18 (4, 6 x 150 mm, 5 um) korištena kao stacionarna faza, a mješavina vodene otopine mravlje kiseline (pH = 2, 8) i acetonitrila kao mobilna faza. Najbolje razdvajanje postignuto je optimizacijom gradijentne elucije tijekom koje postotak organske faze (acetonitrilni udio) raste od 2% do 12, 5% u 10 minuta, uz protok 0, 7 ml/min, ukupno trajanje elucije 21 min i volumen ubrizgavanja 20 µL. Pikovi su detektirani UV detektorom pri valnoj duljini od 280 nm. Standardi serotonina, dopamina, noradrenalina i adrenalina koncentracije 500, 250, 125, 65.5 i 31.3 µM korišteni su za određivanje retencijskog vremena za identifikaciju pikova u uzorcima mozga. te za izradu dnevnih kalibracijskih krivulja. Koncentracije neurotransmitera u uzorcima izračunate su pomoću kalibracijske krivulje i podataka o površini pikova te izraženi kao pg neurotransmitera po miligramu tkiva. Kromatogrami standarada i uzorci moždanog tkiva pokazali su dobru razlučivost i simetriju pikova što potvrđuje dobru selektivnost metode. Linearnost i ponovljivost su također bile zadovoljavajuće. Pikovi adrenalina i noradrenalina su u većini uzoraka bili spojeni pa su računati zajedno kao jedan vrh "noradrenalin+adrenalin" (NA+A). Ženke i mužjaci vrste P. siculus pokazali su značajno više vrijednosti prosječne razine dopamina (254.36 pg/mg and 360.41 pg/mg) nego ženke i mužjaci vrste P. melisellensis (225.5 pg/mg and 195.56 pg/mg). Dvosmjerna analiza varijanci (2-way ANOVA) pokazala je statistički značajan utjecaj vrste (p=0.0347), ali nije bilo statistički značajnog utjecaja spola (p=0.3922) ili interakcije vrste i spola (p=0.1312). Na razine serotonina i noradrenalina+adrenalina vrsta, spol te interakcija vrste i spola nisu imale statistički značajan utjecaj. Budući da je porast koncentracije dopamina povezan s povećanjem lokomotorne aktivnosti, bržim učenjem i agresivnim ponašanjem, statistički značajna razlika u razini dopamina između ove dvije vrste guštera mogla bi stajati u podlozi njihovog različitog afektivnog ponašanja i prilagodljivosti.

monoamini, 5HT, katekolamini, ponašanje, gušteri

nije evidentirano