hrvatski

Brza prolazna ekspresija humanog stimulirajućeg faktora granulocitno-makrofagnih kolonija u dva industrijska kultivara duhana (Nicotiana tabacum)

Ekspresija različitih proteina sisavaca u biljkama područje je biotehnologije u razvoju. Do danas je tako pokušana ekspresija i proizvodnja brojnih proteinskih faktora od farmaceutskog značaja. Stimulirajući faktora granulocitno-makrofagnih kolonija (GM-CSF) je citokin koji djeluje kao faktor rasta bijelih krvnih stanica. T-stanice, B-stanice, makrofagi, stanice endotela, fibroblasti i adipociti kao odgovor na faktore rasta ili upalni podražaj proizvode GM-CSF. Imunološki odgovor tipa Th1, angiogeneza, alergijske upale te razvoj autoimunosti su svi potaknuti GM-CSF-om te je tako ovaj citokin dio nekoliko složenih imunološko/upalnih kaskada. U ovom smo radu opisali uspješnu proizvodnju humanog GM-CSF (hGM-CSF) u listovima dva industrijska kultivara duhana. Koristili smo tehniku prolazne ekspresije potpomognutu infiltracijom s bakterijama Agrobacterium tumefaciens. Prethodno je gen za hGM-CSF ugrađen u dva binarna vektora korištenjem brzog kloniranja tehnikom Gateway. Kako bi omogućili uspješnu detekciju rekombinantnog hGM-CSF-a na njegov smo C-terminalni završetak dodali proteinski biljeg od 6 histidina (His-tag). Nakupljanje rekombinantnog hGM-CSF ovisilo je o prisutnosti surfaktanata (faktora vlaženja) tijekom infiltracije vakuumom, dužini infiltracije vakuumom i starosti listova. Cijeli postupak od dizajna eksperimenta do proizvodnje i detekcije rekombinantnog hGM-CSF trajao je šest mjeseci. Ovime smo pokazali da su industrijski kultivari duhana pogodne platforme za brzu, jeftinu i efikasnu produkciju hGM-CSF te vjerojatno i drugih rekombinantnih proteina.

duhan ; prolazna ekspresija ; GM-CSF ; vakuum infiltracija

nije evidentirano