hrvatski

Utvrđivanje tipa mutacije u genu za NPM1 ključno je za pravilno praćenje minimalne ostatne bolesti

UVOD: Akutne mijeloične leukemije (AML) heterogena su skupina bolesti, a citogenetski normalne AML predstavljaju najveći izazov u molekularnoj dijagnostici. Ovisno o dokazanim mutacijama individualno se pristupa terapiji, a izazov je i praćenje minimalne ostatne bolesti. Mutacije u genu za NPM1 su, prema preporukama Svjetske zdravstvene organizacije, nužne uz analizu ostalih gena za potpunu dijagnostiku AML. Ipak, za odabir prave metode za dokazivanje mutacija, a kasnije i praćenje minimalne ostatne bolesti nema preporuka. CILJ: Utvrditi pouzdanost protokola za utvrđivanje tipa mutacija u genu za NPM1 te za praćenje minimalne ostatne bolesti. BOLESNICI i METODE: U istraživanje su bila uključena 23 AML bolesnika s dokazanom mutacijom u genu za NPM1 fragmentarnom analizom prema Thiede C i sur, Blood 2006. Iz dijagnostičkog uzorka koštane srži izdvojene su RNA (Trizol) i DNA (MagNA Pure, Roche). Sekvenciranje gena NPM1 iz uzorka DNA izvedeno je prema Sangeru na 3130 Genetic Analyser (ThermoFisher Scientific, SAD). Uzorak RNA korišten je za kvantifikaciju mutacije A komercijalnim kompletom reagensa (ipsogen NPM1 mut A, Qiagen) PCR-om u stvarnom vremenu (LightCycler 2.0, Roche). Rezultati kvantifikacije izraženi su kao broj kopija NPM1 mutacije A /104ABL1. REZULTATI: Sekvenciranjem je utvrđena mutacija A (c.863_864insTCTG) kod 19 bolesnika, mutacija B (c.863_864insCATG) kod 3 bolesnika i mutacija H (c.863_864ins CTTG) kod 1 bolesnice. U svim je uzorcima neovisno o rezultatima sekvenciranja dobivena ekspresija mutacije A u rasponu 150 – 131560/10e4ABL1. Podjelom bolesnika u dvije skupine prema tipu mutacije na skupinu s mutacijom A te skupinu s drugim mutacijama, dobivene su razlike u količini ekspresije mutacije A. Skupina s mutacijom A imala je statistički bitno više vrijednosti ekspresije mutacije A: medijan 34529/10e4ABL1 (raspon 5543 – 131560/10e4ABL1) dok je skupina s dokazanim drugim mutacijama imala ekspresiju mutacije A: medijan 1291/10e4ABL1 (raspon 150 – 2622/10e4ABL1), p= 0, 002. ZAKLJUČAK: Za dokazivanje mutacija u genu za NPM1 potrebno je slijediti protokol koji uključuje fragmentarnu analizu za dokazivanje mutacije, sekvenciranje gena za utvrđivanje tipa mutacije, a kvantitativni PCR za praćenje minimalne ostatne bolesti.

AML, NPM1 mutacija, minimlna ostatna bolest

nije evidentirano