hrvatski

Optimiziranje spektrofluorimetrijske metode za određivanje malondialdehida u urinu

Spektrofluorimetrija predstavlja jednu od osjetljivnijih metoda s obzirom na mogućnost detekcije željenog spoja u smjesi bez prethodnog odjeljivanja. Malondialdehid (MDA) je stabilan produkt lipidne peroksidacije te je uzet za mjerenje razine oksidacijskog stresa u uzorcima humanog urina. Metoda korištena u ovom radu za određivanje koncentracije MDA u urinu temelji se na reakciji MDA s dvije molekule 2-tiobarbituratne kiseline (2-TBA) pri visokoj temperaturi od 90ºC i kiselim uvjetima koji su postignuti korištenjem 1% otopine o-H3PO4. Prije mjerenja ispitane su interferencije korištenjem kreatinina, uree, 2-TBA i o-H3PO4. Ispitivanja su napravljena na spektrofluorimetru OLIS RSM 1000F s ekscitacijom na λ=515 nm i detekcijom emisije na λ=553 nm. Ispitivanja interferencija nisu pokazala značajan signal ispitanih supstancija pri λ=553 nm. Za validaciju metode korišteni su standardi otopine MDA dobiveni razrjeđivanjem matične komercijalne otopine 1, 1, 3, 3-tetraetoksipropana te su izrađeni standardi u rasponu od 0, 5 do 6, 07 μmol/L. Validacijom u vodi dobiven je regresijski pravac y=0, 1723x+0, 0298 s R2=0, 9975. Ponovljivost u seriji za koncentraciju standarda 2, 02 μmol/L iznosila je 3, 02%, dok je ponovljivost iz dana u dan bila 4, 27%. Granica detekcije bila je na 0, 078 μmol/L, a granica određivanja na 0, 237 μmol/L. Kod validacije u urinu dobiven je regresijski pravac y=0, 135x+0, 0061 s R2=0, 9901. Ponovljivost u seriji za koncentraciju standarda 2, 02 μmol/L iznosila je 5, 18%, dok je ponovljivost iz dana u dan bila 5, 14%. Granica detekcije bila je na 0, 248 μmol/L, a granica određivanja na 0, 746 μmol/L. Mjerenjem koncentracije MDA u urinu sedmorice zdravih dobrovoljaca i izračunom koncentracije pomoću kalibracijske krivulje dobivene su vrijednosti koncentracije MDA 1, 41±0, 59 μmol/L. Kako bi se poništio utjecaj matriksa isti su uzorci izmjereni metodom standardne adicije poznate koncentracije MDA te su dobivene vrijednosti 1, 01±0, 17 μmol/L. Dobivene vrijednosti validacije i rezultata mjerenja uzoraka upućuju na to kako su obje metode pouzdane za mjerenje koncentracije MDA u urinu, ali metoda standardom adicijom daje točnije vrijednosti.

Spketrofluorimetrija, lipidna peroksidacija, malondialdehid, standardna adicija, validacija

nije evidentirano