hrvatski

Kloniranje fragmenta DNA umnoženog PCR metodom u plazmidni vektor

Kloniranje gena ili dijelova gena u molekularnoj biologiji je skup metoda kojima se željene sekvence iz DNA molekule umnažaju u stanici domaćinu. Eksperimentalni rad započinje umnažanjem željenog fragmenta DNA konvencionalnim metodama poput PCR-a i cijepanjem DNA restrikcijskim enzimima. Nakon toga slijedi ligacija fragmenta DNA (inserta) i lineariziranog plazmidnog vektora kako bi se osiguralo nastajanje plazmida koji se može replicirati u stanici domaćinu te unošenje plazmida u stanicu domaćina u kojoj dolazi do njegovog umnažanja. Na taj način iz jedne rekombinantne DNA nastaje veliki broj istovjetnih molekula DNA što predstavlja samu bit kloniranja. U ovom radu konstruiran je insert Δ246 iz gena SCW4 kvasca Saccharomyces cerevisiae te je ugrađen takozvanom TA-ligacijom u plazmidni vektor pGem-T Easy. Takvim plazmidom su transformirane kompetentne stanice bakterije Escherichia coli. Naposljetku je iz transformiranih stanica izoliran umnoženi plazmid, koji je podvrgnut restrikcijskoj analizi odgovarajućim restrikcijskim enzimima te je rezultat provjeren elektroforetskom analizom restrikcijske smjese.

Kloniranje, ligacija, transformacija

nije evidentirano