hrvatski

Proizvodnja i karakterizacija alfa-amilaze bakterije Lactobacillus amylovorus DSM 20531T

Amilolitička bakterija mliječne kiseline Lactobacillus amylovorus DSM 20531T uzgojena je modificiranoj MRS podlozi, u koju je umjesto glukoze dodana maltoza (20, 0 g L-1). Uzgoj u MRS podlozi s maltozom (MRS-mal20) proveden je u laboratorijskom bioreaktoru s miješalom (VK = 6, 0 L) pri konstantnoj temperaturi (40oC) i uz održavanje pH vrijednosti suspenzije u bioreaktoru (pH 5, 5). L. amylovorus DSM 20531T odmah nakon nacjepljivanja počinje transportirati maltozu, hidrolizira je i razgrađuje isključivo do mliječne kiseline. Istovremeno s razgradnjom maltoze i homofermentativnom proizvodnjom mliječne kiseline odvija se sinteza biomase (eksponencijalni rast) i to sve do t = 6, 0 h bioprocesa, kada bakterija ulazi u stacionarnu fazu rasta. Nakon toga se usporavaju potrošnja maltoze, sinteza bakterijske biomase i proizvodnja mliječne kiseline. Do kraja bioprocesa (t = 24, 0 h) koncentracija maltoze je opala do 6, 95 g L-1 i proizvedeno je 11, 34 g L-1 mliječne kiseline tako da je koeficijent konverzije maltoze u mliječnu kiselinu (YP/S) iznosio samo 0, 87 g g-1. Soj L. amylovorus DSM 20531T sintetizira alfa-amilazu i transportira je izvan stanice. Izolacija alfa-amilaze provedena je afinitetnom kromatografijom i to iz supernatanta uzoraka izuzetih pri kraju eksponencijalne i stacionarne faze rasta. Propuštanjem otopine alfa-ciklodekstrina kroz kolonu eluirane su i separirane na baznoj liniji različite frakcije alfa-amilaze. SDS- PAGE metodom utvrđeno je da se frakcija 1 (F1) sastoji od nekoliko proteinskih vrpci koje imaju molekulsku masu <30, 0 kDa.

maltoza, Lactobacillus amylovorus, alfa-amilaza, afinitetna kromatografija, SDS-PAGE

nije evidentirano