hrvatski

Učinci preopterećenja željezom u eksperimentalnom autoimunosnom encefalomijelitisu

SAŽETAK Cilj istraživanja Glavni cilj istraživanja bio je utvrditi i usporediti učinke preopterećenja željezom u Dark Agouti (DA) štakora oba spola u modelu kronično-relapsirajućeg eksperimentalnog autoimunosnog encefalomijelitisa (CR-EAE) te u štakora oba spola navedenog soja u kojih nije bila učinjena indukcija CR-EAE-a. Pratili smo utjecaj preopterećenja željezom na i) homeostazu željeza i funkciju jetre, ii) razinu oksidacijskog oštećenja lipida u jetri, mozgu i kralježničnoj moždini, iii) izražaj bjelančevina akutnog stresnog odgovora u tkivima jetre, mozga i kralježnične moždine. U životinja s CR-EAE-om dodatno smo istraživali iv) pojavu i intenzitet kliničkih znakova bolesti i smrtnost te v) opseg demijelinizacije u mozgu i kralježničnoj moždini. Posebna pozornost posvećena je utvrđivanju postojanja spolnog dimorfizma po svim ispitivanim parametrima. Materijal i metode Istraživanja su provedena na mužjacima i ženkama štakora DA soja, dobi 6-8 tjedana koji su bili preopterećeni željezom. U dijela životinja bio je induciran CR-EAE aplikacijom encefalitogena. Za analize je uzet serum te tkiva jetre, mozga i kralježnične moždine štakora. U serumu su metodom ELISA-e (engl. enzyme-linked immunosorbent assay) određene koncentracije feritina i hepcidina, a jetrene transaminaze bikromatskim spektrometrijskim mjerenjem. Spektrometrijske metode korištene su i za određivanje koncentracije željeza i malondialdehida (MDA) u tkivima. Distribucija željeza u tkivima prikazana je histokemijskim bojanjem, a promjene u izražaju bjelančevina 4-hidroksinonenala (4-HNE), hepcidina, metalotioneina I/II (MT I/II) i glikoproteina 96 (gp96) imunohistokemijskim bojanjem parafinskih rezova tkiva. Demijelinizacijske promjene u tkivima mozga i kralježnične moždine prikazane su metodom Klüver-Barrera, a metodom imunofluorescencije dodatno je proučen izražaj hepcidina i MT I/II u neuronima kralježnične moždine. Rezultati U DA štakora koji su bili preopterećeni željezom, a u kojih nije bio induciran CR-EAE, pronađene su spolne razlike u nekim od istraživanih parametara. Ženke su imale jači izražaj hepcidina i MT I/II u svim ispitivanim tkivima, a mužjaci jači izražaj gp96 u tkivima jetre i mozga. Rezultati preopterećenja željezom pokazali su puno izraženije spolne razlike u štakora s CR-EAE-om. Preopterećenje željezom utjecalo je na klinički tijek bolesti na način da je u ženki došlo do ranijeg početka i ranijeg razvoja akutne faze bolesti, a u mužjaka je ubrzana pojava relapsa te značajno povećana smrtnost. Ženke s CR-EAE-om su pokazale veću sklonost pohrane željeza u obliku feritina, što je bilo potaknuto i većom koncentracijom hepcidina. Produkti lipidne peroksidacije (MDA, 4-HNE) bili su jače izraženi u jetri ženki, a u mužjaka u mozgu i kralježničnoj moždini, što su pratile jače razvijene demijelinizacijske promjene, osobito u kralježničnoj moždini. Spolnim razlikama pridonio je i jači izražaj citoprotektivnih elemenata (hepcidina, MT I/II, gp96) u tkivima ženki s CR-EAE-om preopterećenih željezom u odnosu na odgovarajuću skupinu mužjaka, osobito u neuronima mozga i kralježnične moždine. Zaključak Dobiveni rezultati ukazuju da preopterećenje željezom različito utječe na mehanizme koji reguliraju homeostazu željeza u štakora DA soja s i bez znakova CR-EAE-a, na periferiji i u središnjem živčanom sustavu. Preopterećenje željezom utječe i na dinamiku CR-EAE-a u mužjaka i ženki DA štakora. Ono u mužjaka rezultira većom razinom oksidacijskog oštećenja lipida, a u ženki jačim izražajem citoprotektivnih bjelančevina, što bi moglo biti u svezi s ispoljenim spolnim razlikama u početku bolesti, intenzitetu kliničkih znakova i smrtnosti.

Encefalomijelitis, autoimunosni, eksperimentalni ; Lipidna peroksidacija ; Multipla skleroza ; Preopterećenje željezom ; Spol

nije evidentirano