Nalazite se na CroRIS probnoj okolini. Ovdje evidentirani podaci neće biti pohranjeni u Informacijskom sustavu znanosti RH. Ako je ovo greška, CroRIS produkcijskoj okolini moguće je pristupi putem poveznice www.croris.hr
izvor podataka: crosbi !

Transkripcija in vitro gena za tRNASer iz arheje Methanococcus maripaludis i provjera njihove funkcionalnosti (CROSBI ID 335283)

Ocjenski rad | diplomski rad

Jarić, Jelena Transkripcija in vitro gena za tRNASer iz arheje Methanococcus maripaludis i provjera njihove funkcionalnosti / Weygand-Đurašević, Ivana (mentor); Gruić-Sovulj, Ita (neposredni voditelj). Zagreb, Prirodoslovno-matematički fakultet, Zagreb, . 2002

Podaci o odgovornosti

Jarić, Jelena

Weygand-Đurašević, Ivana

Gruić-Sovulj, Ita

hrvatski

Transkripcija in vitro gena za tRNASer iz arheje Methanococcus maripaludis i provjera njihove funkcionalnosti

Transfer ribonukleinske kiseline imaju važnu ulogu u biosintezi proteina povezujući kodone u mRNA s odgovarajućom aminokiselinom. U stanici uglavnom postoji više molekula tRNA za jednu aminokiselinu. Takve tRNA nazivaju se izoakceptori. U sklopu istraživanja strukture i funkcije seril-tRNA-sintetaza (SerRS) iz arhealnih organizama transkribirani su in vitro pomoću T7 RNA-polimeraze sintetski geni za tri izoakceptorske tRNASer (s antikodonima GCT, TGA i GGA) iz arheje Methanococcus maripaludis koji su bili pripremljeni ranije u laboratoriju i uklonirani u visokokopijske plazmide. Dobiveni in vitro-transkripti tRNASer pročišćeni su denaturirajućom poliakrilamidnom gel-elektroforezom te im je određena aktivnost aminoaciliranjem serinom pomoću SerRS iz M. maripaludis. Ispitivanjem uvjeta renaturacije in vitro-transkripata pokazano je da način renaturacije ovisi o primarnoj strukturi tRNA. Budući je in vitro-transkript tRNASerGCT imao najveću akceptorsku aktivnost, na tom se transkriptu sprovela sustavna analiza uvjeta renaturacije. Uzorci tRNA sporo su renaturirani uz dodatak različitih koncentracija Mg2+ iona na različitim temperaturama. Nanošenjem tih uzoraka na nativni poliakrilamidni gel opažene su ili dodatne vrpce tRNA, vrlo vjerojatno konformeri ili oligomeri tRNA, ili je uočena hidroliza tRNA. Samo se brza renaturacija (denaturacija 5˘ na 80 °C, dodatak 10 mmol dm-3 MgCl2 na 70 °C, hlađenje 20˘ na sobnoj temperaturi) pokazala pogodna za dobivanje homogenog uzorka tRNASerGCT. Rezultati aminoacilacijskog testa pokazali su da su molekule tRNA, koje su imale drukčiju elektroforetsku pokretljivost na nativnom poliakrilamidnom gelu, ipak odgovarajući supstrati enzima SerRS. Gel-retardacijskom elektroforezom, pri pH 7,0 i uz 10 mmol dm-3 Mg2+, detektiran je nekovalentni kompleks SerRS iz M. maripaludis i in vitro-transkripta tRNASerGCT. Nekovalentni kompleksi SerRS i tRNASerTGA te SerRS i tRNASerGGA, pri istim uvjetima, nisu detektirani.

Methanococcus maripaludis; nekovalentni kompleks; renaturacija tRNA; SerRS; transkripcija in vitro; tRNA

nije evidentirano

engleski

In vitro transcription of Methanococcus maripaludis tRNASer genes and functional analysis of the transcripts

nije evidentirano

Methanococcus maripaludis; noncovalent complex; renaturation of tRNA; SerRS; transcription in vitro; tRNA

nije evidentirano

Podaci o izdanju

72

18.06.2002.

obranjeno

Podaci o ustanovi koja je dodijelila akademski stupanj

Prirodoslovno-matematički fakultet, Zagreb

Zagreb

Povezanost rada

Biologija