hrvatski

Utjecaj mutacije Ser291 na enzimsku aktivnost tirocidin-sintetaze 1 (TycA)

Tirocidin sintetaza spada u skupinu neribosomskih peptid sintetaza (NRPS). Proizvod njene aktivnosti je antibiotik tirocidin. Neribosomske peptid sintetaze su veliki, multienzimski kompleksi na kojima se odvija sinteza peptida neovisno o glasničkoj RNA molekuli. Njihove proizvode nazivamo neribosomskim peptidima (NRP). Mnogi od njih se upotrebljavaju kao terapeutska sredstava u različitim granama medicine. U ovom radu provodili smo biokemijska istaživanja na prvom modulu tirocidin sintetaze, tirocidin sintetazi 1 (TycA). Preliminarna istraživanja na ovom proteinu pokazala su kako je serinski ostatak na položaju 291 podložan fosforilaciji. U tu svrhu konstruirane su tri varijante TycA proteina sa zamjenama Ser291Glu, Ser291Ala i Ser291Arg kojima je potom izmjerena enzimska aktivnost. Rezultati mjerenja enzimske aktivnosti ukazali su kako mutacija Ser291Glu uzrokuje smanjenje brzine enzimske reakcije za 8, 3 %, mutacija Ser291Arg uzrokuje povećanje brzine enzimske reakcije za 33, 3 %, dok mutacija Ser291Ala dovodi do porasta u brzini od 91, 6 %. Dobiveni podaci ukazuju da je Ser291 proteina TycA vjerojatno fosforiliran, jer njegovom zamjenom s glutaminskom kiselinom koja ''oponaša'' fosfoserin dolazi do pada brzine enzimske reakcije za samo 8, 3 % što je u granicama eksperimentalnih odstupanja dok mutacija u pozitivni arginin i neutralni alanin uzrokuje porast brzine enzimski katalizirane reakcije.

neribosomske peptid sintetaze, tirocidin sintetaza 1 (TycA), fosforilacija, adenilacijska domena, enzimska aktivnost

nije evidentirano