engleski

Construction of bifunctional plasmid vectors for system Escherichia coli - Streptomyces

Molekularno genetička istraživanja streptomiceta su značajno porasla poslijednjih godina, ali je još uvijek prisutan nedostatak prikladnih vektora za kloniranje gena. Mi smo zbog potreba vlastitih istraživanja, konstruirali bifunkcionalne plazmidne vektore koji nam omogućuju prijenos kloniranih fragmenata DNA (gena) iz streptomiceta u bakteriju E.coli i obrnuto. Konstruirana su dva bifunkcionalna plazmida: pZG5 i pZG6. P ZG5 je nastao spajanjem E. coli plazmida bluescribe M13- (3.2 kb, rezistencija na ampicilin) sa streptomicetnim plazmidom pIJ350 (4.26 kb, rezistencija na tiostrepton). Plazmidi su spojeni preko jedinstvenih PstI restrikcijskih mjesta, a nastali bifunkcionalni plazmidi pZG5 (7.45 kb) ima sposobnost stabilne replikacije u E.coli, S.rimosus i S.lividans (moguće i šire). pZG5 posjeduje niz jedinstvenih mjesta za kloniranje gena (EcoRI, BanII, SacI, XbaI, SphI i HindIII), promotore za RNA polimeraze T3 i T7, te izvor replikacije bakteriofaga M13, koji omogućuje sintezu jednolančane kružne "plazmidne" DNA u E. coli. pZG6 je konstruiran spajanjem E.coli plazmida pUC18 (2.68 kb, rezistencija na ampicilin) s PIJ350, također preko PstI restrikcijskih mjesta. pZG6 je veličine 6.95 kb, te posjeduje ista jedinstvena restrikcijska mjesta kao i pZG5. Stabilnost ovog bifunkcionalnog plazmida je provjerena u E.coli i S.lividans. pZG5 i pZG6 nisu u našim eksperimentima pokazali uočljivu nestabilnost prilikom replikacije u S.rimosus ili S.lividans, dok se u bakteriji E.coli potpuno stabilno repliciraju u vrlo visokom broju kopija.

Shuttle vectors, Plasmid stability, Multiple cloning sites, Streptomyces rimosus, Streptomyces lividans

nije evidentirano