Nalazite se na CroRIS probnoj okolini. Ovdje evidentirani podaci neće biti pohranjeni u Informacijskom sustavu znanosti RH. Ako je ovo greška, CroRIS produkcijskoj okolini moguće je pristupi putem poveznice www.croris.hr
izvor podataka: crosbi !

Expression and cytotoxicity mediated by granulysin in peripheral blood lymphocytes of patients with psoriatic arthritis (CROSBI ID 408455)

Ocjenski rad | doktorska disertacija

Massari, Dražen. Expression and cytotoxicity mediated by granulysin in peripheral blood lymphocytes of patients with psoriatic arthritis / Laškarin, Gordana, prof. dr, sc. ; Ćurković, Božidar, prof. dr. sc. (mentor); Laškarin, Gordana, prof. dr, sc. ; Ćurković, Božidar, prof. dr. sc. (neposredni voditelj). Rijeka, Medicinski fakultet u Rijeci, . 2012

Podaci o odgovornosti

Massari, Dražen.

Laškarin, Gordana, prof. dr, sc. ; Ćurković, Božidar, prof. dr. sc.

Laškarin, Gordana, prof. dr, sc. ; Ćurković, Božidar, prof. dr. sc.

engleski

Expression and cytotoxicity mediated by granulysin in peripheral blood lymphocytes of patients with psoriatic arthritis

Cilj istraživanja: Cilj je istraživanja bio utvrditi moguće promjene u raspodjeli i izražaju granulizina (GNLY) u leukocitnim subpopulacijama te u GNLY-posredovanoj citotoksičnosti stanica NK uz analizu popratnog unutarstaničnog izražavanja interferon gama (IFN-), interleukina (IL)-4, IL-15 i IL-17 u limfocitnim subpopulacijama periferne krvi bolesnika s aktivnim stadijem i remisijom psorijatičnog artritisa (PsA) u odnosu na skupinu zdravih ispitanika i bolesnika s osteoartritisom koljena (OA). Također je analizirana korelacija između vrijednosti srednjeg intenziteta fluorescencije (MFI) za GNLY s biokemijskim i kliničkim mjernim pokazateljima aktivnosti PsA – hsCRP, SE, HAQ (eng, Health Assessment Questionaire), PASI (Psoriasis Area and Severity Index ili PASI score) te DAPSA (eng. Disease Activity index for PSoriatic Arthritis). Ispitanici i metode: u istraživanje je bilo uključeno 50 bolesnika s aktivnim PsA i 52 bolesnika s PsA u stadiju remisije, koji su zadovoljili uključne kriterije. Kontrolne skupine su sačinjavali bolesnici s osteoartritisom koljena (OA) - (24 bolesnika) i zdravi ispitanici - 20 osoba, koji su po spolu i životnoj dobi odgovarali bolesnicima s PsA. Uzorci periferne krvi (10 ml) sakupljani su nakon predhodno potpisane Informirane suglasnosti odobrene od strane Etičkog povjerenstva Medicinskog Fakulteta Sveučilišta u Rijeci i specijalne bolnice “Thalassotherapia-Opatija” iz Opatije. Suspenziju mononuklearnih stanica periferne krvi dobili smo postupkom naslojavanja krvnih uzoraka i centrifugiranjem na gradijentu gustoće. Zastupljenost GNLY-pozitivnih (+) stanica među mononuklearnim stanicama periferne krvi prikazali smo metodom imunocitokemije na uzorcima dobivenim centrifugiranjem na Cytospin centrifugi. Raspodjelu i udjele GNLY i citokina u mononuklearnim stanicama periferne krvi utvrđivali smo metodom istovremenog obilježavanja unutrastaničnih (GNLY ili pojedinog cikokina) i površinskih (CD14, CD1a, CD19, CD3 i/ili CD56) biljega metodom indirektne i direktne imunofluorescencije Stanicama NK-posredovanu citotoksičnost (sveukupnu smrtnost i apoptozu) prema K-562 liniji stanica humane eritrolukemije određivali smo u 18-satnom testu citotoksičnosti, nakon predhodnog postupka negativnog magnetskog izdvajanja stanica NK Uzorke smo očitavali na FACSCalibur protočnom citometru koristeći se CellQuestPro programom. Rezultate smo analizirali korištenjem računalnog programa WinMDI version 2.9. Statističke analize su učinjene uz pomoć programa Statistika 8.0. Razlike među grupama su ustanovljavane Kruskal-Wallis neparametrijskim testom, a zatim je statistička značajnost računata Mann-Whitney U testom s razinom statističke značajnosti podešene prema broju međusobnih usporedbi. Povezanost brojčanih varijabli, odnosno korelaciju između vrijednosti srednjeg intenziteta fluorescencije za GNLY (MFI) s biokemijskim i kliničkim mjerilima aktivnosti PsA, određivali smo metodom jednostruke linearne regresijske analize. Rezultati: Učestalost GNLY+ stanica se bitno ne razlikuju unutar ograde mononuklearnih stanica i unutar ograde limfocita periferne krvi (LPK) u svim ispitivanim skupinama. Postotak GNLY+ LPK iznosi do 25% u bolesnika s PsA, i nije se razlikovao obzirom na stadij bolesti, ali je statistički značajno bio niži u odnosu na OA. S druge strane, on je u bolesnika s aktivnim PsA bio uvijek viši nego učestalost GNLY+ stanica u zdravih ispitanika, zahvaljujući višim udjelima GNLY+ stanica unutar skupine limfocita T (p<0, 001), stanica NKT (p<0, 001) te obiju podskupina stanica NK - CD56+ (p<0, 0001) i CD56+bright (p<0, 0001). MFI za GNLY je statistički značajno viši u LPK bolesnika s aktivnim stadijem PsA u usporedbi s remisijom bolesti (p<0, 01) i zdravim ispitanicima (p<0, 001). Vrijednost MFI za granulizin ima vrlo dobru (r=0, 41) i statistički značajnu povezanost (p<0, 012) s mjerilom PASI za određivanje zahvaćenosti i jačine kožnih promjena kod psorijatične bolesti. Sveukupna citotoksičnost i apoptoza stanica NK bolesnika s aktivnim stadijem PsA prema K-562 staničnoj liniji je statistički značajno veća, nego kod bolesnika s PsA u remisiji (p<0, 01) i zdravih ispitanika (p<0, 001) u omjerima od 6:1 do 50:1. Apoptoza K-562 stanica posredovana stanicama NK bolesnika s aktivnim PsA statistički je snažno potisnuta (p<0, 01) primjenom protu-GNLY RC8 mAb ili protu-GNLY RF10 mAb, oboje usmjerenih na aktivi oblik GNLY molekule od 9kDa, što nije bio slučaj u testovima citotoksičnosti stanica NK bolesnika s PsA u remisji i zdravih ispitanika, gdje se središnji učinak blokade apoptoze ciljnih stanica postiže primjenom protu-perforinskog mAb. Protu-perforinsko mAb samostalno uklanja apoptozu uzrokovanu stanicama NK u bolesnika s aktivnom fazom bolesti do iste razine do koje i protu-GNLY RC8 mAb i RF10 mAb, ali ne postoji zbrajanje učinaka protu-perforinskog mAb i protu-GNLY mAb. Analizom uzoraka bolesnika s OA koljena uočili smo sličan obrazac raspodjele i udjela GNLY, uključivši i vrijednosti MFI za GNLY kao i kod bolesnika s PsA u aktivnom stadiju. U 18-satnom testu citotoksičnosti, NK-stanicama posredovana apoptoza K-562 stanica ne razlikuje se obimom značajno od vrijednosti u testovima sa zdravim ispitanicima, ali protu-GNLY mAb gotovo u cijelosti može potisnuti apoptozu bolesnika s OA za razliku od zdravih ispitanika. Isti učinak postiže se u prisutnosti protu-perforinskog mAb, a dodatak protu-granulizinskog mAb i protu-perforinskog mAb ne utiče na daljnje smanjivanje apoptoze. Značajno niži udjeli IL-4+ limfocita T (p<0, 01) i IL-4+ limfocita NKT (p<0, 01) u bolesnika s PsA u aktivnom stadiju i bolesnika s OA u odnosu na zdrave ispitanike ukazuju na nedostatni TH2 odgovor tijekom aktiviranja upalnog procesa. Citokinsku prevlast TH1 odgovora dodatno upotpunjuje značajno viši udio IFN-+ stanica NK (p<0, 01) i njezinih CD56+dim (p<0, 01) i CD56+bright (p<0, 01) povdvrsta – u bolesnika s aktivnim stadijem PsA u odnosu na bolesnike u remisiji PsA, na bolesnike s OA i zdrave ispitanike. U bolesnika s OA, udio IL-15+CD56+bright stanica NK te IL-17+CD56+dim stanica NK i IL-17+ limfocita T je statistički značajno veći (p<0, 01 za sve skupine) u odnosu na zdrave ispitanike. Zaključak: Ovim smo istraživanjem ukazali na bogatu zastupljenost molekule apoptotičkog posrednika GNLY u citotoksičnim limfocitima periferne krvi bolesnika s PsA, osobito tijekom aktivnog stadija bolesti, kao i bolesnika s OA koljena u odnosu na zdrave ispitanike. Povišene vrijednosti MFI za GNLY u citotoksičnim limfocitima periferne krvi ove skupine bolesnika, osobito u stanicama NK, odražavaju prosječan broj molekula GNLY po pojedinoj stanic, a time i aktivacijski status tih stanica te objašnjavaju njihovu snažno izraženu citotoksičnost, uključenu u patogenezu bolesti. GNLY je izravno uključen u tijek apoptoze ciljnih stanica i dio svog apoptotičkog učinka posreduje neovisno o perforinu u aktivnoj fazi bolesti PsA i u OA. U stadiju remisije PsA, GNLY ima neznatnu ulogu u apoptozi posredovanoj stanicama NK, jednaku kao u zdravim ispitanicima. Istaknuli smo prevlast TH1 imunosnog odgovora tijekom pogoršanja tijeka PsA i OA koljena, te otvorili mogućnost primjene mjerila MFI za GNLY u procjeni aktivnosti PsA.

granulizin; perforin; knee osteoarthritis; psoriatic arthritis; psoriasis; NK cells; NKT cells; cell cytotoxicity

nije evidentirano

nije evidentirano

nije evidentirano

nije evidentirano

nije evidentirano

nije evidentirano

Podaci o izdanju

197

16.07.2012.

obranjeno

Podaci o ustanovi koja je dodijelila akademski stupanj

Medicinski fakultet u Rijeci

Rijeka

Povezanost rada

Temeljne medicinske znanosti, Kliničke medicinske znanosti