hrvatski

Primjena LAMP metode u dokazu i kvantifikaciji virusa newcastleske bolesti

Newcastleska bolest je virusna, izrazito kontagiozna zarazna bolest domaće peradi i divljih ptica koja uzrokuje visoki pobol i pomor te velike gospodarske štete zbog uginuća, mjera kontrole, suzbijanja i iskorijenjivanja. Iako u RH nije dokazana od 1994. godine, zbog velikih gospodarskih šteta koje bi mogla izazvati potrebna je brza, jednostavna i pouzdana dijagnostika newcastleske bolesti. Cilj ovog rada je istražiti mogućnost primjene metode umnažanja nukleinskih kiselina nazvane petljom posredovano izotermalno umnažanje (engl., Loop-Mediated Isothermal Amplification, LAMP) u potvrdi i apsolutnoj kvantifikaciji virusa newcastleske bolesti u kliničkim uzorcima. Reverznu transkripciju virusne RNK te amplifikaciju i detekciju ciljnih slijedova nukleinskih kiselina proveli smo u jednom koraku na stalnoj temperaturi prateći tijek reakcije pomoću RealTime PCR uređaja. Praćenje odvijanja LAMP reakcije u stvarnom vremenu omogućilo nam je približnu apsolutnu kvantifikaciju početne količine virusne nukleinske kiseline u uzorku na temelju standardne krivulje. RT-LAMP proveden u ovom radu pokazao se kao jednostavna, brza, specifična i osjetljiva metoda umnažanja kao i kvantifikacije nukleinskih kiselina.

newcastleska bolest; LAMP; dokaz; kvantifikacija

nije evidentirano