hrvatski

Analiza proteinskih interakcija citosolne seril- tRNA-sintetaze iz biljke Arabidopsis thaliana

Seril-tRNA-sintetaze (SerRS) su enzimi odgovorni za uspostavu kovalentne veze između pripadne tRNA i aminokiseline serin čime ostvaruju podlogu za ispravnu biosintezu proteina. Uz ovu kanonsku ulogu, SerRS proteini imaju i nekanonske uloge koje ostvaruju samostalno ili uspostavljajući interakcije s drugim staničnim proteinima. U sklopu ovog rada, za potrebe biofizičkih mjerenja pripremljeni su prethodno identificirani potencijalni interakcijski partneri citosolne SerRS iz biljke Arabidopsis thaliana i to glutation-S-transferaza phi 2 (GSTF2) i protein do sada nepoznate funkcije (PNF), dok je kodirajući slijed za ribosomski protein L9 uspješno ugrađen u plazmidne vektore. Nadalje, u svrhu određivanja interakcijskog sučelja citosolne SerRS i nedavno otkrivenog interakcijskog partnera, proteina BEN1 uključenog u metabolizam brasinosteroidnih hormona, osmišljene su i pripremljene skraćene varijante navedenih proteina. Mikrotermoforetska mjerenja pokazala su da citosolna SerRS uspostavlja interakciju s proteinom BEN1 svojom središnjom, katalitičkom domenom, dok protein BEN1 za interakciju s proteinom SerRS koristi nestrukturirani hidrofilni produžetak na N-kraju. Također je pokazana i važnost GST-privjeska koji značajno poboljšava prinos i stabilnost katalitičke domene citosolne SerRS.

rekombinantna tehnologija DNA ; pročišćavanje proteina ; proteinske interakcije ; mikrotermoforeza ; seril-tRNA-sintetaza ; Arabidopsis thaliana

nije evidentirano