engleski

Synthesis and application of sulfonyl- containing aldehyde derivatization compounds in peptide and protein analysis using MALDI mass spectrometer

Metode za detekciju i analizu aminokiselinskog slijeda proteina i peptida te potom za identifikaciju istih spektrometrijom masa većinom se temelje na derivatizaciji peptida ili proteina. Signali peptida i proteina koji se ne mogu detektirati spektrometrijom masa u negativnom načinu rada spektrometra masa postaju detektabilni pomoću derivatizacijskih reagensa u MS i u MS/MS načinu rada. U ovom se radu ispitivalo ponašanje 3, 5-disulfoetil-4- metoksibenzaldehida, novosintetiziranog analoga disulfonične kiseline, kao derivatizacijskog reagensa u odnosu na 2, 4- disulfobenzaldehid. Triptički peptidi goveđeg seruma albumina te peptid angiotenzin korišteni su kao model uspješnosti derivatizacijskog postupka i ionizacije u negativnom MS, te negativnom i pozitivnom MS/MS načinu rada spektrometra masa. Derivatizacijski postupak sulfoniranja N-kraja peptida u vodenoj otopini optimiziran je u odnosu na količinu dodanog reagensa i peptida. Analiza se provodila na instrumentima MALDI TOF/TOF i MALDI Q-TOF u pozitivnom i negativnom načinu rada spektrometra masa uz korištenje kapilarnog tekućinskog kromatografa s kolonom obrnutih faza te s ionskom kolonom za pročišćavanje i razdvajanje derivatiziranih analita. Dobiveni rezultati pokazuju da je za peptide derivatizirane 3, 5-disulfoetil-4- metoksibenzaldehidom potrebna veća energija cijepanja nego za peptide derivatizirane 2, 4- disulfobenzaldehidom. Mogući razlog tome je odsustvo rezonancijske stabilnosti sulfatne skupine u spoju 3, 5-disulfoetil-4- metoksibenzaldehid. U usporednom spoju 2, 4- disulfobenzaldehid, sulfatna skupina je neposredno vezana na benzenski prsten što kod iona u plinskoj fazi stabilizira nastale derivatizirane negativne ione. Moguće predloženo rješenje nastalo istraživanjem ovim diplomskim radom predviđa uvođenje dvostruke veze na alkilni lanac 3, 5- disulfoetil-4- metoksibenzaldehida. Time bi se tijekom fragmentacije negativnih iona dodatno stabilizirala sulfatna skupina i time poboljšala učinkovitost nastajanja b-serije iona, što u konačnici omogućava poboljšano iščitavanje aminokiselina u negativnom načinu rada spektrometra masa.

mass spectrometry ; MALDI ; derivatization ; amino acid analysis

nije evidentirano