hrvatski

Istraživanje svojstava bakterije Legionella longbeachae obilježene zeleno fluorescirajućim proteinom

Legionella longbeachae je gram-negativni štapić koji je kompliciran za genetsku manipulaciju te je stoga malo poznato o životnom ciklusu ove bakterije. Kako bismo doprinjeli ispitivanju patogeneze i životnog ciklusa L. longbeachae, cilj ovog rada bio je proizvesti bakteriju obilježenu zeleno fluorescirajućim proteinom te ispitati njezina svojstva. U istraživanju su korištena dva soja bakterije L. longbeachae: soj NSW 150 i soj A5H5. U pokusima je korišten plazmid pMip koje je sadržavao gen gfp te gen za rezistenciju na kloramfenikol, a korištena metoda unosa plazmida u bakterijsku stanicu bila je elektroporacija. Ispoljavanje gfp gena praćeno je pod fluorescentnim mikroskopom. Nadalje se ispitalo postoji li razlika u brzini rasta u AYE bujonu između legionela koje su obilježene GFP-om i neobilježenih legionela. S obzirom da se amebe često koriste kao modeli za istraživanje unutarstaničnog životnog ciklusa legionele ispitivala se funkcionalnost obilježenih bakterija kokultivacijom s amebom Acanthamoeba castellanii te se pratio broj bakterija tijekom kokultivacije. Rezultati su pokazali da ispitivani sojevi fluoresciraju zeleno u odnosu na kontrolu te da nema razlike u brzini rasta oba soja bakterije. Rezultati također pokazuju da je došlo do porasta broja bakterija tijekom kokultivacije sa amebama te da nema značajne razlike između ispitivanih sojeva legionela. Za bakteriju L. longbeachae obilježenu GFP-om smo u ovom radu dokazali, da se s obzirom na ispitivana svojstva, ponaša kao divlji soj te se stoga ova mutanta može koristi i u daljnim pokusima za ispitivanje životnog ciklusa i patogenosti L. longbeachae.

Legionella; zeleno fluorescirajući protein (GFP); ameba; mutanta

nije evidentirano