hrvatski

Kemo-enzimska sinteza <i>S</i>-glikozida pomoću tioglikoligaze iz <i>Escherichia coli</i>

U ovom radu uzgojena je bakterija <i>Escherichia coli</i> te je pomoću izopropil-<i>β</i>-D-1-tiogalaktopiranozid (IPTG) potaknuta eksprimacija tioglikoligaze. Nakon tog se pristupilo izolaciji tioglikoligaze na način da se najprije lizom (razbijanjem stanične stjenke) oslobodio stanični sadržaj <i>E. coli</i> te se nakon toga pristupilo pročišćavanju proteina različitim tehnikama, da bi uklonili neželjene tvari. Natrij dodecil sulfat-poliakrilamid gel elektroforeza (engl. <i>sodium dodecylsulphate-polyacrylamide gel electrophoresis</i> ; SDS-PAGE), je korištena za potvrdu izoliranog enzima u svim fazama uzgoja bakterije, izolacije i pročišćavanja. Pročišćena tioglikoligaza je korištena za sintezu <i>S</i>-glikozida. Nakon sinteze, dobiveni <i>S</i>-glikozid je pročišćavan u nekoliko faza različitim tehnikama kolonske kromatografije. Tankoslojnom kromatografijom (engl. <i>thin layer chromatography</i> ; TLC) se dokazalo da je dobiven glikozid. U ovom radu je za sintezu S-glikozida korišten enzim odnosno kemo-enzimska sinteza. Enzimi omogućuju stereoselektivnost i regioselektivnost te nema potrebe za zaštitom funkcijskih skupina na supstratu što najčešće nije slučaj kod klasične organske sinteze. Na taj način se smanjuje vrijeme trajanja sinteze i troškovi kemikalija. <br><br> <b>Summary</b> <br><br> In this thesis <i>Escherichia coli</i> was grown and expression of thioglycoligase was induced using isopropyl-<i>β</i>-D-1-thiogalactopiranoside (IPTG). Isolation of thioglycoligase from <i>E. coli</i> cell content, obtained by lysis (cell membrane breakdown), was performed using various isolation and purification techniques. Sodium dodecylsulphate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE), was used to confirm isolated and purified thioglycoligase in all phases. Purified thioglycoligase was used for <i>S</i>-glycoside synthesis. The obtained <i>S</i>-glycoside was purified in several steps using different column chromatography techniques. Thin layer chromatography (TLC) was employed for glycoside confirmation. Chemo-enzymatic synthesis for <i>S</i>-glycoside was used in this thesis as a mean of better stereoselective and regioselective synthesis in contrast to classic organic synthesis. Chemo-enzymatic synthesis also doesn't require substrate functional groups protection and all said enables shorter time of synthesis as well as lower synthesis cost.

kemo-enzimska sinteza ; <i>S</i>-glikozid ; <i>E. coli</i> ; SDS-PAGE ; TLC

nije evidentirano