hrvatski

ZNAČAJNOST ODREĐIVANJA MUTACIJA GENA KRAS I BRAF U BOLESNIKA S KARCINOMOM DEBELOG CRIJEVA

Uvod. Učestalost i smrtnost od karcinoma debelog crijeva u stalnom je porastu i zato je ova bolest vodeći zdravstveni problem u svijetu i u Hrvatskoj. Nastaje složenim procesom tijekom kojeg dolazi do uzastopnih promjena u tumor supresorskim genima, onkogenima i genima za popravak krivo sparenih baza. Karcinom debelog crijeva može se pojaviti sporadično ili kao nasljedni oblik ; u oba slučaja radi se o vrlo heterogenoj skupini zloćudnih tumora. Geni KRAS i BRAF spadaju u skupinu onkogena. Njihovi produkti posreduju u prijenosu signala od receptora za epidermalni čimbenik rasta (EGFR) na unutarstanične mitogenom aktivirane protein kinaze (MAPK), te na taj način sudjeluju u kontroli staničnog ciklusa. Najčešće promjene ovih gena su točkaste mutacije. Događaju se u dobroćudnoj fazi nastanka karcinoma debelog i završnog crijeva i odgovorne su za klinički značajan rast tumora. Cilj ovog rada je odrediti učestalost i vrstu mutacija gena KRAS i BRAF u uzorcima karcinoma debelog i završnog crijeva te ispitati da li postoji povezanost mutacija s patohistološkim pokazateljima lošije prognoze bolesti. Materijali i metode. U istraživanje je uključeno 113 arhivskih uzoraka (tkiva fiksirana u formalinu i uklopljena u parafin) karcinoma debelog i završnog crijeva osoba koje boluju od te bolesti, operiranih u razdoblju od 2009. do 2011. godine u KBC-u Zagreb. Za izdvajanje DNA korišteno je 6-10 rezova debljine 10 mikrometara svakog pojedinog tkiva. Sedam najčešćih točkastih mutacija gena KRAS (p.G12A, p.G12D, p.G12V, p.G12R, p.G12C, p.G12S, p.G13D) određeno je metodom kvantitativnog PCR u stvarnom vremenu, a jedna mutacija gena BRAF (p.V600E) metodom PCR u stvarnom vremenu uz analizu krivulje taljenja. Za svakog bolesnika prikupljeni su podaci o dobi, spolu, veličini tumora, histološkom gradusu tumora, stadiju po Dukes'u, angioinvaziji i smještaju tumora. Usporedba učestalosti mutacija u uzorcima podijeljenim po skupinama učinjena je Fisherovim testom, statističkom obradom podataka u programu MedCalc v9.3.2.0. Rezultati. Mutacije gena KRAS dokazane su u 39, 8% uzoraka, a najčešće je dokazana mutacija p.G12V (42, 2% uzoraka). Tranzicije i transverzije bile su podjednako zastupljene. Mutacija p.V600E gena BRAF dokazana je u 8, 8% uzoraka i to isključivo u uzorcima s nemutiranim genom KRAS. Učestalost mutacija gena BRAF bila je viša u loše diferenciranim tumorima i tumorima klasificiranim u stadij bolesti Dukes'C (p = 0, 04). Sve mutacije gena BRAF dokazane su u karcinomima debelog crijeva (p = 0, 01). Zaključak. Učestalost mutacija gena KRAS i BRAF u populaciji bolesnika s karcinomom debelog i završnog crijeva iz Hrvatske nalazi se unutar granica prijavljene učestalosti istih mutacija u drugim populacijama svijeta. Ističe se visok udio mutacije p.G12V koja se povezuje s najlošijom prognozom bolesti, što bi se moglo povezati s kontinuirano visokom smrtnošću od ove bolesti u Hrvatskoj. Viša učestalost mutacija gena BRAF u tumorima lošije prognoze upućuje na njihovu ulogu u napredovanju bolesti.

KRAS; BRAF; točkaste mutacije; karcinom debelog i završnog crijeva; kliničko-patohistološke osobitosti; prognoza bolesti

nije evidentirano