hrvatski

Funkcijska analiza domene PEPE proteina TROL iz biljke Arabidopsis thaliana (L.) i njezina uloga u regulaciji fotosinteza

U ovom radu istraživana je uloga prolinom bogate domene PEPE proteina TROL u mehanizmima oksigene fotosinteze. Protein TROL integralni je protein tilakoidnih membrana i zadužen je za vezivanje feredoksin-NADP+-oksidoreduktaze (FNR), enzima koji katalizira završni korak prijenosa elektrona na molekulu NADP+. U svrhu utvrđivanja uloge ove domene kloniran je konstrukt bez domene PEPE, uspješnost transformacije potvrđena je lančanom reakcijom polimerazom, selekcija transformanata provedena je na pločama sa higromicinom, a potvrda ekspresije proteina pomoću Western blot analize. Za lokalizaciju nativnih i enzimatski aktivnih kompleksa sa proteinom TROL korištena je plava nativna elektroforeza, a pomoću elektronskog mikroskopa utvrđene su promjene u ultrastrukturi kloroplasta. Promjene u fotosintetskoj učinkovitosti uzrokovane uklanjanjem domene PEPE utvrđene su mjerenjem fluorescencije klorofila in vivo, te utvrđivanjem sadržaja glutationa imunoglod bojenjem česticama zlata. Kao abiotski stresni čimbenik korištena je svjetlost vrlo viskog intenziteta. FNR održava dinamiku sustava i dođe li do narušavanja te dinamike redoks stanje je narušeno te se aktiviraju alternativni putevi prijenosa elektrona. Uklanjanje domene PEPE dovodi do promjena u linearnom toku elektrona. Rezultati mjerenja ukazuju na promjene u radu fotosintetskog aparata tijekom izlaganja biljaka svjetlosnom stresu.

Arabidopsis thaliana ; TROL ; domena PEPE ; FNR ; fotosinteza ; fluorescencija klorofila a ; glutation ; ultrastruktura kloroplasta

nije evidentirano