hrvatski

Heterologna ekspresija i pročišćavanje rekombinantnog proteina TROL u svrhu proizvodnje antiseruma u zečevima

Regulatorni gen At4g01050 smješten na 4. kromosomu biljke Arabidopsis thaliana (L.) Heynh kodira za protein TROL (thylakoid rhodanase-like protein). TROL je integralni membranski protein potreban za vezanje FNR-a (feredoksin-NADP+ reduktaze) i održavanje visoke efikasnosti linearnog toka elektrona u fotosintezi. Heterologna ekspresija dopušta proizvodnju biljnih proteina u organizmu koji je različit od prirodnog izvora. Za povećanu ekspresiju proteina TROL odabran je ekspresijski vektor pRSET A, u kojem je uklonirani gen pod kontrolom T7 promotora. Soj E. coli BL21(DE3)pMico transformiran je ekspresijskim vektorom pRSET A/miniTROL te je ekspresija proteina inducirana dodatkom IPTG-a. Dobiveni rekombinantni protein je zatim pročišćen afinitetnom kromatografijom u nativnim uvjetima i korišten kao antigen za proizvodnju antiseruma u zečevima. Ovako dobiveni antiserum obično je specifičniji i imunoreaktivniji nego antitijela razvijena na kratke sintetske peptide.

thylakoid rhodanase-like protein; rekombintni protein; ekspresija proteina; pročišćavanje proteina; antiserum

nije evidentirano