slovenski

Opis in uporaba bakteriofagov kot protimikrobnih učinkovin za preprečevanje kampilobakterioz

Bakterija Campylobacter jejuni je najpogostejši povzročitelj okužb s hrano v razvitem svetu. Porast tako števila okužb kot tudi odpornosti proti antibiotikom narekujeta razvoj novih metod za zmanjševanje kontaminacije s to bakterijo in ena izmed njih so bakteriofagi. Ugotovili so, da lahko z uporabo bakteriofagov zmanjšamo število bakterij vrste C. jejuni v piščančjem črevesju za faktor med 1 in 4 log10 (Connerton in sod., 2011). V prispevku bomo predstavili sodobne pristope in poglede na bakteriofage kot protimikrobna sredstva ter ugotovitve, ki opisujejo odnos med bakterijo in bakteriofagom ter omogočajo njihovo uporabo. Specifične bakteriofage za C. jejuni smo izolirali iz piščančjega in prašičjega slepega črevesa ter mesa. Pripadajo družini Myoviridae, imajo dvojnovijačno DNA dolžine 130-135kb in litično razkrajajo predvsem seve človeškega izvora, medtem ko so perutninski nanje manj občutljivi. Genetske lastnosti pridobljene s sekvenciranjem izbranih bakteriofagov nakazujejo značilno organizacijo genomov, lahko smo identificirali strukturne in nestrukturne gene, zapisov za toksine ipd. pa nismo našli. Z mutagenezo gostiteljev smo ugotovili, da se bakteriofagi specifično vežejo na komponente kapsule, medtem ko so flagele drugotnega pomena. Specifičnost te interakcije se odraža delno na genetskem nivoju in sposobnosti inaktivacije bakteriofagov s protitelesi. Za potrebe obsežnejših študij učinkovitosti in nadaljnje karakterizacije bakteriofagov smo optimizirali proces priprave bakteriofagov v bioreaktorju ter zaključne procese. Kot prvi smo ugotovili, da proces namnoževanja bakteriofagov bakterijske vrste Campylobacter lahko spremljamo v realnem času z merjenjem deleža koncentracije kisika, ki sovpada s potekom infekcije gostitelja. Te bakteriofage smo primerno koncentrirali in očistili na CIM Multus koloni (Bia Separations, Slovenija) ter jih uporabili v študijah stabilnosti in učinkovitosti v mišjem in celičnem modelu. Stabilnost bakteriofagov in vitro je v večji meri odvisna od pH in temperature, in vivo pa se na bakteriofage odzovejo tudi z nevtralizacijskimi protitelesi, vendar fagi ostanejo infektivni vsaj 12 ur.

Campylobacter; bakteriofagi; protimikrobne snovi

nije evidentirano