hrvatski

Izražaj tirozin kinaznih receptora - EGFR, Her-2, c-kit i ciklina D1 u kolorektalnim karcinomima

Ciljevi istraživanja:ispitati izražaj tirozin kinaznih receptora i ciklina D1 u rutinskom, nasumce odabranim uzorcima, 135 primarnih karcinoma debelog crijeva. Od tirozin kinaznih receptora cilj je bio najprije imunohistokemijski ispitati membranski (mEGFR) i nuklearni (nEGFR) izražaj EGFR te izražaj Her-2, c-kit proteina a potom utvrditi njihovu međusobnu udruženost kao i udruženost s ciklinom D1. Osim proteinskog izražaja cilj je bio ispitati i gensku amplifikaciju EGFR i Her-2 te ju usporediti s proteinskim izražajem navedenih markera. Konačno, cilj je bio usporediti proteinski izražaj i genski status navedenih receptora s prognostičkim parametrima, histološkim stupnjem diferencijacije i stadijem proširenosti bolesti (Dukes klasifikacija). Materijali i metode:imunohistokemijski je obrađeno 135 uzoraka tkiva arhivskog materijala adenokarcinoma različitih lokalizacija tako što se mEGFR, i c-kit izražajnost analizirala na potpunim rezovima, a nEGFR, Her2 i ciklin D1 izražaj na tkivnim mikroarejima. Procjena imunoreaktivnosti navedenih markera utvrđena je prema intenzitetu obojenosti i postotku pozitivnih tumorskih stanica. Florescentnom in situ hibridizacijom analiziran je genski status za EGFR i Her2 (Vysis, Downers Grove, IL, SAD). Stanice s normalnim brojem kromosoma 7 imale su dva narančasta i dva zelena signala po jezgri ili omjer ≤ 2.0 - 2.49, amplifikacija se definirala ako je taj omjer bio ≥ 2, 94, odnosno polisomija, ako je bilo nađeno više od dva CEP7 signala po jezgri na više od 40% tumorskih stanica, ili ako je taj omjer bio između 2.5 – 2.93. Za analizu statusa HER2 gena određivao se omjer zbroja Her-2 signala i kontrolnih CEP17 signala na ukupno 20 jezgara tumorskih stanica. Amplifikacija se definirala kao omjer > 2, 2, a amplifikacije Her-2 gena nije bilo ako je omjer < 1, 8. Statistički podatci obrađivani su na osobnom računalu koristeći neparametrijski test (Spearman koeficjent korelacije rangova). Rezultati:imunohistokemijske analize utvrdili su snažan mEGFR izražaj u 22 (16.3%), odnosno snažan nEGFR izražaj u 77 (57%) kolorektalnih karcinoma. Izražaj mEGFR i nEGFR proteina nije bio međusobno povezan (p = 0.756). Izražaj Her-2 i c-kit proteina bio je u najvećem broju slučajeva kolorektalnih karcinoma negativan, odnosno u 128 (95%) za HER-2 i u nešto manjem broju 84 (62%) za c-kit dok je izražaj ciklina D1 u najvećem broju slučajeva bio snažno pozitivan, točnije u 76 odnosno u 56% slučajeva. Međusobnom udruženosti tirozin kinaznih receptora (EGFR, Her-2i c-kit) nije uočena statistička značajnost, dok je usporedbom njihova izražaja i ciklina D1 utvrđena statistički značajna povezanost samo između nEGFR i ciklina D1 (p<0.001). Metodom FISH analize, u najvećem broju slučajeva nisu utvrđene abnormalnosti, odnosno EGFR amplifikacija potvrđena je u svega 8 (6%), odnosno Her-2 amplifikacija u 4 (3%) kolorektalnih karcinoma. Usporedbom imunhistokemijske i FISH analize utvrđena je statistički značajna udruženst jedino između snažne mEGFR izražajnosti i genske amplifikacije (p= 0.001). Usporedbom rezultata svih navedenih imunohistokemijskih i genskih biomarkera s kliničko-patološkim kriterijima u kolorektalnim karcinomima, jedino je utvrđena udruženost između umjerene izražajnosti mEGFR i tumorskog gradusa (p = 0.042), točnije slabije diferencirani adenokarcinomi karakterizirani su umjerenim izražajem mEGFR. Zaključci:rezultati studije potvrđuju heterogenost unutar skupine kolorektalnih karcinoma koja je udružena s postotkm, intezitetom i subcelularnom lokalizacijom proteinskog izražaja tirozin kinaznih receptora i ciklin D1 te različitim genskim statusom EGFR i HER-2. Uočena heterogenost vjerojanto je povezana s biološki, a moguće i klinički različitim podskupinama kolorektalnih karcinima koje će različito odgovoriti na anti-EGFR terapiju. Sukladno tome rezultati potiču daljnja istraživanja u cilju bolje spoznaje selekcije pacijenata za primjenu ciljane biološke terapije.

kolorektalni karcinom; nuklearni EGFR; Her2; cikli n D1; c-kit; FISH

nije evidentirano