hrvatski

Signalni putovi stanične smrti kod mišjih embrionalnih fibroblasta nakon UVB zračenja

Fasu pridruženi protein s domenom smrti je ključni adapterski protein koji sudjeluje u nizu signalnih procesa u stanici, uključujući i vanjski signalni put apoptoze i signalni put nekroptoze. UVB zračenje može inducirati staničnu smrt putem izazivanja oštećenja DNA, direktno aktivirajući površinske receptore na stanici te putem formacije reaktivnih kisikovih vrsta. U ovom radu ispitan je utjecaj FADD proteina na odabir signalnog puta stanične smrti koja nastupa uslijed UVB zračenja s 300J/m2. Stanice divljeg tipa te stanice kojima nedostaje FADD protein su 24 sata prije zračenja tretirane pankaspaznim inhibitorom zVAD-fmk, koji inhibira proces apoptoze, inhibitorom RIP1 kinaze necrostatin-1, koji inhibira proces nekroptoze, te s oba tretmana istovremeno. Protočnom citometrijom utvrđene su populacije živih stanica, stanica u ranoj apoptozi te stanica u kasnoj apoptozi/nekrozi. Elektoforezom DNA detektirana je apoptoza. Komercijalnim kitovima detektirane su aktivnosti kaspaza-3, -8 i -9. Western imunodetekcijom proteina detektirani su proteini PARP-1, PARP-2 i protein p53 fosforiliran na serinu15. Lančanom reakcijom polimeraze u stvarnom vremenu utvrđena je aktivnost gena BAX i BCL-2. Bojanjem autofagosoma akridin oranžom detektirana je autofagija. Rezultati pokazuju kako mišji embrionalni fibroblasti divljeg tipa uslijed zračenja umiru vanjskim i unutarnjim putem apoptoze i nekroptozom. Moguća je i prisutnost alternativnog puta stanične smrti koji nastupa prilikom inhibicije nekroptoze. FADD-/- mišji embrionalni fibroblasti pokazuju smanjeno preživljenje uslijed zračenja. Rezultati dobiveni za ovaj tip stanica ukazuju na prisutnost oba tipa apoptoze i nekroptoze, no ne kao dominantnih tipova stanične smrti. Također, detektirana je autofagija u svim promatranim uzorcima, no nejasno je javlja li se ona kao zaseban tip stanične smrti ili kao izvršni mehanizam nekroptoze.

FADD; UVB

nije evidentirano