hrvatski

PROČIŠĆAVANJE I STABILNOST 5'-FOSFODIESTERAZE IZ SLADNIH KLICA

U ovom je radu 5'-fosfodiesteraza (EC 3.1.4.1) iz sladnih klica ekstrahirana prekonoćnim suspendiranjem u Tris-HCl puferu pH 8, 9 pri 37 oC. Djelomično pročišćavanje sirovog enzimskog pripravka je provedeno taloženjem acetonom u dva stupnja. Nakon dijalize, enzimski pripravak je pročišćavan kromatografijom na ionskim izmjenjivačima - S-Sepharose i DEAE-Sepharose. Eluacija je vršena Na-acetatnim puferom pH 5, 5, odnosno pH 3, 5. Enzim je pročišćen 101, 11 puta i postigao je specifičnu aktivnost od 81, 9 U/mg proteina. Elektroforezom na SDS-poliakrilamidnom gelu je potvrđeno da je 5'-fosfodiesteraza trimerni enzim sastavljen od podjedinica čije su molarne mase 56, 43 i 26 kDa. Ovaj je enzim pokazao izrazitu stabilnost tijekom 8 dana pohranjivanja pri + 4 oC i inkubaciji pri 37, 55 i 70 oC tijekom 60, 90 i 120 minuta

sladne klice; 5'-fosfodiesteraza; pročišćavanje proteina; stabilnost enzima

nije evidentirano