Napredna pretraga

Pregled bibliografske jedinice broj: 667173

Izolacija i strukturna karakterizacija novih poliketida, derivata antrona dobivenih biosintezom


Borovička, Branko
Izolacija i strukturna karakterizacija novih poliketida, derivata antrona dobivenih biosintezom 2012., doktorska disertacija, Fakultet kemijskog inženjerstva i tehnologije, Zagreb


Naslov
Izolacija i strukturna karakterizacija novih poliketida, derivata antrona dobivenih biosintezom
(Isolation and structural characterisation of novel polyketides, anthrone derivatives, obtained via biosynthesis)

Autori
Borovička, Branko

Vrsta, podvrsta i kategorija rada
Ocjenski radovi, doktorska disertacija

Fakultet
Fakultet kemijskog inženjerstva i tehnologije

Mjesto
Zagreb

Datum
29.10

Godina
2012

Stranica
143

Mentor
Hranueli, Daslav

Neposredni voditelj
Silvana Raić-Malić

Ključne riječi
Poliketidni antibiotik; oksitetraciklin; derivati antrona; izolacija; pročišćavanje; određivanje struktura; nuklearna magnetna rezonancija
(Polyketide antibiotic; oxytetracycline; anthrone derivatives; isolation; purification; structure determination; nuclear magnetic resonance)

Sažetak
Oksitetraciklin (OTC) je poliketidni antibiotik, čija je okosnica izgrađena od 19 C-atoma, a sintetizira ga bakterijska vrsta Streptomyces rimosus soj R6. Genska nakupina, čiji su produkti odgovorni za biosintezu oksitetraciklina, sastoji se od 23 gena koji su klonirani i djelomično sekvencirani. Jedan od njezinih gena, gen otcC, sadržava genetičku uputu za anhidrotetraciklin oksigenazu, enzim koji katalizira hidroksilaciju antraciklinske strukture na položaju C-6 nakon što je sintetizirana poliketidna okosnica. Rekombinantni soj bakterije S. rimosus ZGL1, u kojem je kopija gena otcC inaktivirana insercijom genetičkog biljega, sintetizira tri nove poliketidne strukture od 17 C-atoma. Izolacija novih poliketidnih derivata provedena je pomoću ekstrakcije organskim otapalima i kromatografijom na koloni. Pročišćavanje novih spojeva obavljeno je tankoslojnom kromatografijom (TLC) i tekućinskom kromatografijom visoke djelotvornosti (HPLC). Određivanje struktura novih spojeva provedeno je primjenom jedno- i dvodimenzijske (1D i 2D) spektroskopije pomoću nuklearne magnetne rezonancije (NMR) i spektrometrije masa (MS). Izolacija, pročišćavanje i strukturna karakterizacija pokazale su da su dobivena tri nova poliketida, derivata antrona. Ovaj rezultat upućuje da odsutnost proizvoda gena otcC znatno utječe na sintezu poliketidnog produkta odgovarajuće dužine lanca pomoću enzimskog kompleksa poliketid sintaze (PKS). Inaktivacija gena otcC obavljena je mjesno specifičnom mutagenezom triju ključnih aminokiselina koji se nalaze unutar pretpostavljene NADPH-vezujuće domene. Inaktivirani je gen ekspresiran u stanicama bakterije Escherichia coli, a biokemijska analiza je pokazala da je proizvod gena katalitički neaktivan. Kada je u kromosomu soja S. rimosus ZGL1 inaktivirani otcC gen zamijenjen funkcionalnim otcC genom, obnovljena je sposobnost za sintezu poliketidne okosnice od 19 C-atoma. To upućuje na činjenicu da je protein OtcC bitan partner u kvarternoj strukturi enzimskog kompleksa poliketid sintaze.

Izvorni jezik
Hrvatski

Znanstvena područja
Biotehnologija



POVEZANOST RADA


Projekt / tema
058-0000000-3475 - Generiranje potencijalnih lijekova u uvjetima in silico (Daslav Hranueli, )

Ustanove
Prehrambeno-biotehnološki fakultet, Zagreb