hrvatski

Permeabilizacija stanica Pseudomonas putida

Pseudomonas putida je gram-negativna štapićasta bakterija koja se pojavljuje u različitim životnim sredinama i koja ima mogućnost da razgradi najzahtjevnije organske spojeve. Perforacija stanične membrane (permeabilizacija) omogućuje bolju propusnost kako bi se omogućio nesmetan prolaz tvari i proizvela visoka i stabilna aktivnost enzima unutar cijele stanice. U ovom radu je optimirana metoda permeabilizacije stanica Pseudomonas putida u svrhu dobivanja što više aktivnosti enzima benzoilformat dekarboksilaze. U tu svrhu prvo je napravljen eksperiment u bioreaktoru u kojem su se stanice P. Putida uzgojile. Zatim se koristilo više različitih permeabilizacijskih agensa, te se upotrebom najboljeg optimiralo vrijeme permeabilizacije, kao i koncentracija agensa. Postupak permeabilizacije s različitim detergentima, kelatnim agensom i organskim otapalima bio je uspješan samo za detergent CTAB i organsko otapalo heksan. Kada su stanice prije permeabilizacije bile tretirane lizozimom, postupak je bio uspješan za sve permeabilizacijske agense. Ovim postupkom najbolji rezultati su dobiveni tretiranjem stanica sa detergentom CTAB- om. Optimiranjem vremena permeabilizacije utvrđeno je da se najviša aktivnost enzima benzoilformat dekarboksilaze postiže permeabilizacijom tijekom 15 minuta. Optimalna koncentracija detergenta CTAB za enzim benzoilformat dekarboksilazu iznosi 0, 15%.

Pseudomonas putida; uzgoj mikroorganizama; permeabiliziriane stanice; benzoilformat dekarboksilaza

nije evidentirano