hrvatski

Eukariotske karakteristike izoleucil-tRNA-sintetaze iz bakterije Streptomyces griseus

Izoleucil-tRNA-sintetaze (IleRS) su enzimi koji kataliziraju nastajanje Ile-tRNAIle. Eukarioti posjeduju IleRS koja se po svojoj primarnoj strukturi, osjetljivosti na antibiotik mupirocin i supstratnoj specifičnosti razlikuje od prokariotskih homologa. Mupirocin snažno inhibira IleRS brojnih bakterija, ali ne i eukariota. Međutim, postoje prokariotske vrste, među njima Streptomyces griseus, čiji se aminokiselinski sljedovi IleRS sravnjuju s eukariotskim. Gen za IleRS iz S. griseus ukloniran je u ekspresijski vektor i eksprimiran u bakteriji Escherichia coli. Funkcionalan protein pročišćen je afinitetnom kromatografijom. Kinetička karakterizacija pokazala je da IleRS iz S. griseus heterologno aminoacilira kvaščevu i E. coli tRNA. Budući da prokariotski tip IleRS (E. coli IleRS) ne aminoacilira kvaščevu tRNAIle, rezultati upućuju da IleRS iz S. griseus nalikuje kvaščevom homologu koji aminoacilira E. coli tRNA. Difuzijski test je pokazao neosjetljivost IleRS iz S. griseus na mupirocin i time ga grupirao s eukariotskim IleRS. Također, pokazano je da IleRS iz S. griseus omogućuje rast E. coli u prisutnosti mupirocina.

aminoacil-tRNA-sintetaze ; elementi identiteta ; komplementacija mupirocin ; tRNA

nije evidentirano