hrvatski

Disulfidne veze u preusmjeravajućim motivima RGD ili NGR ugrađenim u adenovirus tip 5

Replikacijski defektni adenovirusi tipa 5 (Ad5) koriste se kao vektori za gensku terapiju tumora. Preusmjeravanje Ad5 postiže se ugradnjom preusmjeravajućih motiva u proteine kapside, najčešće u HI-petlju vlakna ili u hipervarijabilnu regiju heksona 5 (HVR5). Integrini αv često su povećano eksprimirani na stanicama tumora u odnosu na normalno tkivo, a preusmjeravajući motiv kojim se mogu preusmjeravati Ad5 na αv integrine na površini stanice je RGD. U genskoj terapiji tumora mogu se ciljati i stanice koje podržavaju rast tumora kao što su endotelne stanice u angiogenezi koje stvaraju nove krvne žile u tumoru. Endotelne stanice u angiogenezi eksprimiraju aminopeptidazu N, a preusmjeravajući motiv koji se veže na APN je NGR. Poznato je da različiti aminokiselinski okoliš, posebice postojanje cisteina oko RGD i NGR motiva ugrađenih u HI-petlju vlakna Ad5 utječe na afinitet vezanja za odgovarajući receptor. Cilj ovog rada bio je istražiti postoje li disulfidne veze u dvama replikacijski defektnim Ad5 vektorima: (i) Ad5HCRGDC s preusmjeravajućim motivom CRGDC ugrađenim u HVR5 i (ii) Ad5ARAP s motivom CNGRCVSGCAGRC ugrađenim u HI-petlji vlakna Ad5. Pokazano je da obrada Ad5HCRGDC ditiotreitolom ne mijenja djelotvornost transdukcije stanica rabdomiosarkoma (RD), što znači da ne utječe na vezanje na αv integrine. Potvrda da cisteini unutar CRGDC motiva ne stvaraju disulfidne veze dobivena je spektrometrijom masa. Obrada Ad5ARAP ditiotreitolom dokida sposobnost preusmjeravanja ovog virusa na APN eksprimiran na stanicama RD, što znači da cisteini smješteni oko NGR preusmjeravajućeg motiva u CNGRCVSGCAGRC stvaraju disulfidnu/e vezu/e, istovremeno važnu/e za vezanje na receptor APN. Analiza peptidnog okoliša preusmjeravajućih motiva omogućuje bolje razumjevanje odnosa strukture i funkcije preusmjeravajućih motiva što pomaže u dizajnu preusmjerenih adenovirusa s ciljem genske terapije tumora.

adenovirus tip 5 ; disulfidne veze ; RGD i NGR preusmjeravajući slijed

nije evidentirano