Supstratna specifičnost auksin-amidohidrolaze IAR3 iz kineskog kupusa (Brassica rapa L.) (CROSBI ID 376564)
Ocjenski rad | diplomski rad
Podaci o odgovornosti
Grenković, Renata
Salopek-Sondi, Branka
hrvatski
Supstratna specifičnost auksin-amidohidrolaze IAR3 iz kineskog kupusa (Brassica rapa L.)
Auksini su biljni hormoni koji imaju ključnu ulogu u gotovo svim procesima rasta i razvitka biljaka. Auksini, poglavito indol-3-octena kiselina (IAA), u niskim koncentracijama djeluju stimulativno dok su u višim koncentracijama toksični za biljku. Proces konjugacije IAA s aminokiselinama ili šećerima predstavlja dio homeostatskog mehanizma kojim se suvišak IAA skladišti ili detoksificira. Enzimi auksin-amidohidrolaze hidroliziraju aminokiselinske konjugate auksina oslobađajući aktivne spojeve. Auksin-amidohidrolaze su metaloenzimi iz M20 porodice peptidaza. Predmet istraživanja u ovom radu je auksin-amidohidrolaza BrIAR3 izolirana iz kineskog kupusa (Brassica rapa L. ssp. pekinensis (Lour.)). Cilj ovog rada bio je ispitati specifičnost enzima BrIAR3 spram konjugata auksina (IAA-Ala, IBA-Ala, IPA-Ala) te testom inhibicije rasta korijena in vivo ispitati fiziološku aktivnost slobodnih auksina (IAA, IPA, IBA) i njihovih konjugata. Rekombinantni protein BrIAR3 pripremljen je metodom heterologne ekspresije u kulturi bakterije Escherichia coli, te izoliran i pročišćen afinitetnom kromatografijom pomoću Ni-NTA agaroze. Čistoća proteina provjerena je elektroforezom u poliakriamidnom gelu u denaturirajućim uvjetima (SDS-PAGE). Određena je enzimska aktivnost BrIAR3, pri čemu su produkti reakcija analizirani metodom tekućinske kromatografije visoke učinkovitosti (HPLC). Bioinformatička analiza proteina provedena je korištenjem on-line programa. Utvrđeno je da protein BrIAR3 preferira konjugat aminokiseline alanina s dugolančanim auksinom indol-3-propionskom kiselinom (IPA-Ala) kao supstrat. Testom inhibicije rasta korijena utvrđeno je da među slobodnim auksinima najsnažnije inhibitorno djelovanje iskazuje IAA, a među ispitivanim konjugatima IPA-Ala, što upućuje na oslobađanje aktivne, slobodne forme auksina djelomično aktivnošću auksin-amidohidrolaze BrIAR3.
auksin-amidohidrolaza; konjugati auksina; HPLC; kineski kupus; Brassica rapa L. ssp. pekinensis (Lour.)
nije evidentirano
engleski
Substrate specificity of auxin-amidohydrolase IAR3 from Chinese cabbage (Brassica rapa L.)
nije evidentirano
auxin-amidohydrolase; auxin conjugates; HPLC; Chinese cabbage; Brassica rapa L. ssp. pekinensis (Lour.)
nije evidentirano
Podaci o izdanju
66
21.12.2012.
obranjeno
Podaci o ustanovi koja je dodijelila akademski stupanj
Prirodoslovno-matematički fakultet, Zagreb
Zagreb