hrvatski

Protokoli za izolaciju i transformaciju protoplasta uročnjaka

Biljne stanice posjeduju staničnu stijenku koja im pruža mehaničku i kemijsku zaštitu, ali svojom prisutnošću onemogućuje njihovu učinkovitu transformaciju. Protoplasti, biljne stanice kojima je stanična stijenka uklonjena su stoga vrlo učinkovit alat za transformacije biljnih stanica različitim metodama mikroinjektiranja, elektroporacije ili transformacijom protoplasta uz prisutnost PEG-a i Ca2+. Gubitkom stanične stijenke omogućen je nesmetan prodor vode i drugih tvari u stanicu što dovodi u hipotoničnoj otopini do bubrenja stanice i u konačnici do stanične smrti, čime je metoda izolacije protoplasta svrstana u delikatne eksperimentalne metode. Posljednjih 40 godina rađena su mnoga istraživanja na protoplastima različitih biljaka čime je došlo do usavršavanja protokola za izolaciju protoplasta. Seminarski rad se bazirao na protokolima za izolaciju i transformaciju protoplasta uročnjaka Arabidopsis thaliana. Za izolaciju protoplasta najčešće se koristi protokol koji su usavršili Damm i sur. (1988) sa određenim modifikacijama. Izolacija protoplasta uključuje predtretman, enzimatsku razgradnju i purifikaciju protoplasta. Nakon što se protoplasti izoliraju, u njih se mogu unijeti različite makromolekule (npr. DNA, RNA, proteini) u svrhu različitih istraživanja. Transformacija koja se najviše koristi je transformacija u prisutnosti PEG-a i Ca2+ . U seminarskom radu je također predstavljena i nova metoda izolacije protoplasta koja je nedavno objavljena sa navedenim prednostima i načinom izvedbe.

biljni protoplasti; transformacija

nije evidentirano