hrvatski

Modulacija rekombinantnih GABA-A receptora neurosteroidom dehidroepiandrosteron- sulfatom/Modulation of recombinant GABA-A receptors by neurosteroid dehydroepiandrosterone sulfate

Cilj: Ispitati izaziva li dugotrajno izlaganje neurosteroidu dehidroepiandrosteron-sulfatu (DHEAS)adaptivne promjene GABAA receptora, koje se povezuju sa razvojem ovisnosti i tolerancije. Metode: Da bi potvrdili interakcije DHEAS-a sa rekombinantnim GABA-A receptor ima, usporedili smo parametre vezivanja [3H]DHEAS-a, te učinke DHEAS-a na vezivanje [3H]flunitrazepama za membrane HEK 293 stanica, netransfeciranih i stabilno transfeciranih α1β2γ2S GABA-A receptorima. Zatim smo, na stanicama koje eksprimiraju α1β2γ2S GABA-A receptore, istražili učinke dugotrajne primjene DHEAS-a na vezivanje [3H]flunitrazepama i [3H]TBOB-a i na njihovu modulaciju GABA-om. Rezultati: DHEAS se ponaša kao alosterički antagonist rekombinantnih α1β2γ2S GABA-A receptora eksprimiranih u HEK 293 stanicama. Izlaganje ovih stanica 100 μM DHEAS-u tijekom 48 sati nije promijenilo broj niti afinitet veznih mjesta za benzodiazepine i konvulzive. Dugotrajna primjena DHEAS-a takoñer nije utjecala na funkcionalne alosteričke interakcije izmedju veznih mjesta GABA-A receptora, što se očituje u nepromijenjenoj sposobnosti GABA-e da stimulira vezivanje [3H]flunitrazepama odnosno da inhibira vezivanje [3H]TBOB-a. Zaključak: Dugotrajno izlaganje DHEAS- u ne izaziva promjene u ekspresiji i funkcionalnoj povezanosti GABA-A receptora, za koje se pretpostavlja da su u podlozi razvoja tolerancije i ovisnosti. Takvi rezultati mogli bi biti značajni u slučajevima dugotrajne terapije, potrebne za primijećene pozitivne učinke DHEAS-a. Aim:To investigate whether long-term exposure to neurosteroid dehydroepiandrosterone sulfate (DHEAS) induces adaptive changes of GABA-A receptors, related to the development of tolerance and dependence. Methods: To confirm interactions of DHEAS with recombinant GABA-A receptors, we compared the parameters of [3H]DHEAS binding, and the effects of DHEAS on [3H]flunitrazepam binding, in the membranes of HEK 293 cells, nontransfected and stably transfected with α1β2γ2S GABA-A receptors. In cells expressing α1β2γ2S GABA-A receptors, we further investigated the effects of long-term DHEAS treatment on the [3H]flunitrazepam and [3H]TBOB binding and on their modulation with GABA. Results:DHEAS behaves as an allosteric antagonist of the recombinant α1β2γ2S GABA-A receptors expressed in HEK 293 cells. Exposure of these cells to 100 μM DHEAS for 48 h have not changed the number or affinity of the binding sites for benzodiazepines and convulsants. Long- term DHEAS treatment also failed to affect functional allosteric interactions between GABA-A receptor binding sites, as evidenced by a unchanged ability of GABA to stimulate or to inhibit [3H]flunitrazepam and [3H]TBOB binding, respectively. Conclusion:Prolonged exposure to DHEAS does not produce changes in the GABA-A receptor expression and functional coupling, assumed to underlie the development of tolerance and dependence. Such findings might be important in the case of long-term therapy, necessary for the observed beneficial effects of DHEAS.

DHEAS; GABAA receptor; HEK 293 stanice; dugotrajna primjena; vezivanje liganada

nije evidentirano

engleski

Modulation of recombinant GABA-A receptors by neurosteroid dehydroepiandrosterone sulfate

Cilj: Ispitati izaziva li dugotrajno izlaganje neurosteroidu dehidroepiandrosteron-sulfatu (DHEAS)adaptivne promjene GABAA receptora, koje se povezuju sa razvojem ovisnosti i tolerancije. Metode: Da bi potvrdili interakcije DHEAS-a sa rekombinantnim GABA-A receptor ima, usporedili smo parametre vezivanja [3H]DHEAS-a, te učinke DHEAS-a na vezivanje [3H]flunitrazepama za membrane HEK 293 stanica, netransfeciranih i stabilno transfeciranih α1β2γ2S GABA-A receptorima. Zatim smo, na stanicama koje eksprimiraju α1β2γ2S GABA-A receptore, istražili učinke dugotrajne primjene DHEAS-a na vezivanje [3H]flunitrazepama i [3H]TBOB-a i na njihovu modulaciju GABA-om. Rezultati: DHEAS se ponaša kao alosterički antagonist rekombinantnih α1β2γ2S GABA-A receptora eksprimiranih u HEK 293 stanicama. Izlaganje ovih stanica 100 μM DHEAS-u tijekom 48 sati nije promijenilo broj niti afinitet veznih mjesta za benzodiazepine i konvulzive. Dugotrajna primjena DHEAS-a takoñer nije utjecala na funkcionalne alosteričke interakcije izmedju veznih mjesta GABA-A receptora, što se očituje u nepromijenjenoj sposobnosti GABA-e da stimulira vezivanje [3H]flunitrazepama odnosno da inhibira vezivanje [3H]TBOB-a. Zaključak: Dugotrajno izlaganje DHEAS- u ne izaziva promjene u ekspresiji i funkcionalnoj povezanosti GABA-A receptora, za koje se pretpostavlja da su u podlozi razvoja tolerancije i ovisnosti. Takvi rezultati mogli bi biti značajni u slučajevima dugotrajne terapije, potrebne za primijećene pozitivne učinke DHEAS-a. Aim:To investigate whether long-term exposure to neurosteroid dehydroepiandrosterone sulfate (DHEAS) induces adaptive changes of GABA-A receptors, related to the development of tolerance and dependence. Methods: To confirm interactions of DHEAS with recombinant GABA-A receptors, we compared the parameters of [3H]DHEAS binding, and the effects of DHEAS on [3H]flunitrazepam binding, in the membranes of HEK 293 cells, nontransfected and stably transfected with α1β2γ2S GABA-A receptors. In cells expressing α1β2γ2S GABA-A receptors, we further investigated the effects of long-term DHEAS treatment on the [3H]flunitrazepam and [3H]TBOB binding and on their modulation with GABA. Results:DHEAS behaves as an allosteric antagonist of the recombinant α1β2γ2S GABA-A receptors expressed in HEK 293 cells. Exposure of these cells to 100 μM DHEAS for 48 h have not changed the number or affinity of the binding sites for benzodiazepines and convulsants. Long- term DHEAS treatment also failed to affect functional allosteric interactions between GABA-A receptor binding sites, as evidenced by a unchanged ability of GABA to stimulate or to inhibit [3H]flunitrazepam and [3H]TBOB binding, respectively. Conclusion:Prolonged exposure to DHEAS does not produce changes in the GABA-A receptor expression and functional coupling, assumed to underlie the development of tolerance and dependence. Such findings might be important in the case of long-term therapy, necessary for the observed beneficial effects of DHEAS.

DHEAS; GABAA receptor; HEK 293 cells; long-term treatment; ligand binding

nije evidentirano