hrvatski

Bojanje gelova na aktivnost beta-1,3-egzoglukanaze nakon elektroforeze

U ovome radu opisana je jednostavna i osjetljiva metoda za vizualizaciju egzo-beta-1,3-glukanaza u poliakrilamidnim gelovima. Procedura se sastoji od enzimske reakcije u gelu sa supstratom alfa-naftilglukopiranozidom, nakon čega su gelovi bojani pomoću Fast Red B, ili Fast Blue BB. Za razvijanje i optimiziranje metode za bojanje na aktivnost korištena je smjesa egzo-beta-1,3-glukanaza iz podloge za uzgoj Polyporus squamosus. Metoda se može koristiti kod standardne Laemmli elektroforeze u diskontinuiranom sistemu, čak i uz prisustvo SDS-a, kao i kod elektroforeze u linearnom gradijentu polialkrilamidne koncentracije. Metoda bojanja korištena je za analizu egzoglukanaza nekoliko rodova kvasaca. Svi proučavani kvasci izlučuju dvije vrste egzoglukanaza, pa se u gelu mogu uočiti vrpce visoke molekularne mase, te jedna ili dvije manjih izoenzima.

elektroforeza u poliakrilamidu; bojanje na aktivnost; egzoglukanaze

nije evidentirano