hrvatski

Kloniranje i izolacija elongacijskog faktora Tu iz bakterije Escherichia coli te ispitivanje interakcija s aminoaciliranom tRNALeu

Elongacijski faktor Tu (EF-Tu) je esencijalan protein koji u aktivnom, GTP-veznom obliku ostvaruje interakciju s aminoaciliranom tRNA (aa- tRNA) i doprema ju do ribosoma. Nadalje, pokazano je da EF-Tu sudjeluje u osiguravanju točnosti biosinteze proteina. Pripremljeni su rekombinantni plazmidi koji omogućavaju ekspresiju proteina EF- Tu s His- privjeskom na N-, odnosno C-kraju. Sposobnost proizvedenih proteina da ostvaruju interakcije s Leu-tRNALeu istražena je poliakrilamidnom gel- elektroforezom u nativnim uvjetima. U skladu s literaturnim navodima, protein s His-privjeskom na N-kraju imao je značajno manji afinitet prema Leu- tRNALeu od proteina s His-privjeskom na C-kraju. Iz tog razloga, proizvedena je proteaza TEV kojom je uspješno odcijepljen His-privjesak s N-kraja što je značajno utjecalo na porast afiniteta proteina EF-Tu prema Leu-tRNALeu. Nadalje, istražene su interakcije navedenih proteina s tRNALeu aminoaciliranom nepripadnom aminokiselinom norvalinom (Nva). Svi konstrukti EF-Tu ostvarili su interakcije sličnog afiniteta s Leu-tRNALeu i Nva-tRNALeu. Pokazana neselektivnost EF-Tu objašnjava pojavu ugradnje norvalina u stanične proteine u specifičnim uvjetima.

elongacijski faktor Tu / Escherichia coli / leucil-tRNALeu / leucil-tRNA-sintetaza / gel-elektroforeza u nativnim uvjetima / norvalil-tRNALeu / proteaza TEV

nije evidentirano