hrvatski

Ispitivanje vijabilnosti legionela izloženih sušenju

Legionele su fakultativni unutarstanični patogeni koji parazitiraju unutar slobodno-živućih ameba i zbog povoljnih uvjeta, razmnožavaju u velikom broju. Prilagođene su na život u vodenom okolišu, no sposobne su živjeti i u tlu (Legionella longbeachae). Upravo sposobnost unutarstaničnog razmnožavanja u alveolarnim makrofazima, ključna je za pojavu legionarske bolesti najčešće uzrokovane vrstom Legionella pneumophila. Uz amebe i alveolarne makrofage, spomenuti unutarstanični patogeni se razmnožavaju i unutar različitih staničnih linija kao što su alveolarne epitelne (A549) stanice. Cilj ovog istraživanja bio je ispitati utjecaj sušenja na kultivabilnost, vijabilnost i patogenost dviju vrsta bakterija roda Legionella. Kultivabilnost je praćena nasađivanjem na BCYE podlozi, vijabilnost LIVE/DEAD tehnikom fluorescentnog bojenja, a patogenost kokultivacijom VBNC oblika bakterija s Achantamoeba castellanii i infekcijom A549 stanica. U ovom istraživanju, bakterije su pripremljene u sterilnoj vodi. Po 20 μl bakterijske suspenzije (~10(8) CFU/ml) nakapano je na mikrotitar pločicu u 5 rupica te izloženo laminarnom strujanju zraka u sterilnoj komori kroz 1 sat. Sušene bakterije, kao i kontrolna bakterijska suspenzija u vlažnim uvjetima, čuvane su na sobnoj temperaturi. U različitim vremenskim intervalima, bakterije su rehidrirane i kultivirane na BCYE agaru. Bakterijske stanice izložene sušenju dodane su A. castellanii i inkubirane 48 sati u PAGE mediju. Inkubacija A549 stanica inficiranih bakterijskim stanicama izloženima sušenju trajala je 2 sata nakon čega su razarane i nasađivane u deseterostrukim razrijeđenjima na BCYE podlogama. 3, 7 i 10 dan sušenja bakterijske suspenzije ispitivana je vijabilnost LIVE/DEAD tehnikom fluorescentnog bojenja. Nakon rehidracije obje vrste moguće je kultivirati na BCYE agaru samo nakon 1 dana izlaganja sušenju. Nakon 15 dana sušenja legionele su sposobne inficirati amebe i razmnožavati se unutar njih, dok u kulturi alveolarnih epitelnih stanica (A549) i L. pneumophila i L. longbeachae adheriraju i internaliziraju do 4 dana nakon izlaganja suhim uvjetima. LIVE/DEAD postupkom dokazano je kako obje vrste legionela i deseti dan nakon što su bile izložene sušenju, zadržavaju svojstvo vijabilnosti. Izlaganjem suhim uvjetima, L. pneumophila i L. longbeachae brzo gube kultivabilnost, ali svojstvo vijabilnosti i patogenosti zadržavaju 15 dana nakon podvrgavanja sušenju zbog čega mogu predstavljati opasnost za ljude.

suhi uvjeti; Legionella; Acanthamoeba castellani; A549 stanice; viability

nije evidentirano