Biološki učinak metil-transferaze RmtB u stanicama bakterije Escherichia coli DH5alpha (CROSBI ID 372170)
Ocjenski rad | diplomski rad
Podaci o odgovornosti
Mihalic, Vladimir
Maravić Vlahoviček, Gordana
hrvatski
Biološki učinak metil-transferaze RmtB u stanicama bakterije Escherichia coli DH5alpha
Mehanizam otpornosti na antibiotike modifikacijom ciljnog mjesta djelovanja posredovan 16S rRNA metil-transferazama iz porodica Arm i Kam uobičajen je kod sojeva bakterija koji su prirodni proizvodači antibiotika, a pronađen je i kod patogenih sojeva otpornih na aminoglikozidne antibiotike. Metil-transferaze porodice Arm metiliraju evolucijski visoko očuvano mjesto A ribosomske podjedinice 30S na nukleotidu G1405 te time „zaklanjaju“ vezno mjesto za aminoglikozidne antibiotike čineći bakteriju otpornom na njih. Cilj ovog rada je ispitati biološki učinak metil-transferaze RmtB u stanicama E. coli DH54. Usporedbom generacijskih vremena stanica E. coli DH5alpha sa i bez rekombinantnog plazmida koji sadrži gen za metil-transferazu RmtB te provedbom testa konkurencije rasta stanica ispitano je usporava li prisutnost metil-transferaze RmtB rast stanica E. coli DH5alpha te opterećuje li enzim stanice kad se uzgajaju u zajedničkoj kulturi s istim stanicama bez metil-transferaze tijekom više ciklusa rasta. Kako bi se istražili mogući mehanizmi uzroka sporijeg rasta stanica s metil-transferazom RmtB proveden je beta-galaktozidazni test. Njime je ispitan utjecaj metil-transferaze RmtB na točnost dekodiranja tijekom translacije mRNA na ribosomu. Rezultati pokazuju da stanice E. coli DH5alpha koje eksprimiraju metil-transferazu RmtB rastu sporije od stanica koje ju ne eksprimiraju što upućuje da prisutnost metil-transferaze usporava rast bakterijske stanice. Također, u uvjetima nadmetanja za hranjive tvari i životni prostor stanice E. coli DH5alpha s metil-transferazom RmtB ne mogu konkurirati stanicama bez ovog enzima. Provedbom beta-galaktozidaznog testa pokazalo se da prisutnost metiltransferaze RmtB metilacijom ciljnog nukleotida u 16S rRNA uzrokuje učestalije pogreške prilikom dekodiranja na A i P-mjestu ribosoma tijekom elongacije što može biti uzrok uocenog usporenja rasta stanica. Dobiveni rezultati daju podlogu za daljnja istraživanja o metil-transferazama iz porodice Arm kao faktoru otpornosti na aminoglikozidne antibiotike te njihovom utjecaju na biokemijske procese kljucne za život bakterijske stanice čime se otvaraju mogućnosti razvoja novih tipova lijekova važnih u suzbijanju bakterijske otpornosti na aminoglikozidne antibiotike.
metil-transferaza RmtB; otpornost na aminoglikozide; test konkurencije rasta; generacijsko vrijeme; tocnost dekodiranja
nije evidentirano
engleski
Biological effect of methyltransferase RmtB in Escherichia coli DH5alpha
nije evidentirano
methyltransferase RmtB; aminoglycoside resistance; growth competition assay; generation time; decoding fidelity
nije evidentirano
Podaci o izdanju
63
03.05.2012.
obranjeno
Podaci o ustanovi koja je dodijelila akademski stupanj
Farmaceutsko-biokemijski fakultet
Zagreb