hrvatski

Utjecaj kratkih heterolognih sekvencija na integraciju plazmida u genom kvasca Saccharomyces cerevisiae

U ovom radu istraživan je utjecaj kratkih heterolognih sekvencija (do 102 pb) na integraciju kružnih i lineariziranih plazmida u genom kvasca Saccharomyces cerevisiae. PLazmidi korišteni za transformaciju imaju dvije regije kvašćeve DNA, CYC1 i URA3, od kojih jedna (CYC1, 1782 pb) sadrži inserciju i deleciju 4 para baza te palindromsku i nepalindromsku sekvenciju dugu 102 para baza. Rezultati dobiveni s kružnim plazmidima pokazali su da palindromska insercija utječe na usmjeravanje i konačni ishod rekombinacijskog događaja. Osim toga, ustanovljeno je da terminalne heterologije (do 51 pb) prisutne na oba kraja linearizirane plazmidne molekule smanjuju efikasnost transformacije i do 20 puta, a na jednom kraju samo 2 do 4 puta. U istom eksperimentalnom sustavu pokazano je da homologija između heterolognih krajeva nema značajnog utjecaja na efikasnost transformacije, te da protein Rad1 nije potreban za uklanjanje terminalnih heterologija. Hibridizacijom genomske DNA metodom po Southernu analizirano je 100 transformanata te je u 97 slučajeva zabilježena ciljana integracja plazmida u kvašćev lokus CYC1, dok su tri transformanta nastala ilegitimnim transformacijskim događajem. Međutim, u 19 od spomenutih 97 transformanata homologna transformacija nije bila povezana s gubitkom cjelokupne terminalne heterologije s kraja plazmidne molekule

insercije; integracija plazmida; kvasac; popravak dvolančanog loma; rekombinacija; terminalna heterologija

nije evidentirano