hrvatski

Pogreške kod određivanja genotipa insercijsko-delecijskog polimorfizma gena angiotenzina I-konvertirajućeg enzima: uzrok i moguće rješenje problema

Pogreške kod određivanja I/D polimorfizma gena angiotenzin-konvertirajućeg ezima javljaju se zbog predominantnog umnažanja D alela, prilikom čega se dio I/D heterozigota pogrešno prikazuje kao D/D homozigoti. Rigat i sur. (1992) prvi su opisali kratku PCR metodu za određivanje ACE genotipa. Međutim, postoji velika razlika u duljini divljeg i mutiranog alela što je osnovni razlog nesrazmjerne brzine umnažanja I i D alela te pogrešnog genotipiziranja I/D heterozigota. Cilj ovoga rada je ispitati može li se predominantno umnažanje D alela potisnuti umnažanjem znatno dužeg odsječka DNA molekule (tzv. Long PCR metoda). U tom slučaju, vrijeme potrebno za umnažanje dvije sekvence veličine 1293 bp i 1581 bp neće se značajno razlikovati. Istraživanje je obuhvatilo 184 uzoraka u kojima je određen genotip I/D polimorfizma ACE gena standardnom metodom po Rigatu (koja je opreznije optimirana) i novom Long PCR metodom. Također je napravljena međulaboratorijska usporedba s rezultatima dobivenim u Laboratoriju za molekularnu genetiku Medicinskog fakulteta, Sveučilišta u Rijeci. Rezultati dobiveni standardnom metodom i novom metodom su se 100% podudarali, dakle, pogreška kod genotipiziranja ovim metodama iznosi 0%. Točni rezultati mogu se dobiti standardnom metodom po Rigatu i novom Long PCR metodom. Dakle, ukoliko se metoda po Rigatu opreznije optimira, točne rezultate možemo dobiti i tom jednostavnom, jeftinom i brzom metodom.

nesrazmjerna brzina umnažanja; optimiranje; pogrešno određivanje; predominantno umnažanje

nije evidentirano