hrvatski

Uvođenje mutacija u sintetsko mjesto izoleucil- tRNA-sintetaze s ciljem rasvjetljavanja mehanizma hidrolitičkog popravka

Aminoacil-tRNA-sintetaze (aaRS) su enzimi koji kataliziraju reakciju kovalentnog vezanja aminokiseline na odgovarajuću molekulu tRNA. Uslijed nemogućnosti izbora pripadne aminokiseline s visokim stupnjem točnosti, neke aaRS su razvile mehanizme kojima popravljaju pogreške pri aminoacilaciji. Popravkom prije prijenosa uklanjaju se pogreške nastale prilikom aktivacije nepripadne aminokiseline, a popravkom poslije prijenosa one nastale njenim prijenosom na tRNA. Najnovija istraživanja upućuju na to da se kod izoleucil-tRNA-sintetaze (lleRS) popravak prije prijenosa odvija u sintetskom mjestu enzima, gdje dolazi do kinetičke razdiobe nepripadnog aminoacil-adenilata između reakcija hidrolize i prijenosa aminokiseline na tRNA. Ciljana mutageneza odabranih bočnih ogranaka u sintetskom mjestu i kinetička karakterizacija dobivenih mutanata IleRS pridonijele su razumijevanju mehanizma kojim se odvija reakcija aktivacije pripadne i nepripadne aminokiseline te hidroliza nepripadnih aminoacil-adenilata. Tako, hidrolitički popravak u sintetskom mjestu ovisi o preciznoj konformaciji aktivnog mjesta koja pozicionira nepripadni aminoacil-adenilat u hidrolitičko podmjesto. Dobiveni rezultati upućuju da Gly56, Tyr59 i Glu561 imaju važnu ulogu prilikom razlikovanja pripadnih i nepripadnih supstrata te pozicioniranja katalitičke molekule vode.

aminoacil-tRNA-sintetaze ; mehanizmi popravka pogreške ; popravak pogreške prije prijenosa ; ciljana mutageneza ; izoleucil-tRNA-sintetaza ; hidroliza aminoacil-adenilata

nije evidentirano