hrvatski

Uspostava klonova stanica CAL 27 s trajno utišanim genom nm23-H2

Gen nm23 je prvi otkriveni supresor metastaziranja. Do danas je otkriveno deset članova obitelji nm23 gena od kojih većina posjeduje aktivnost nukleozid-difosfatske kinaze. NDP kinaze kataliziraju prijenos fosfatne skupine između nukleozid difosfata i nukleozid trifosfata preko histidina na poziciji 118. Iz obitelji Nm23 najviše su proučavani Nm23-H1 i Nm23-H2. Uz spomenutu NDP kinaznu aktivnost ovi proteini posjeduju i aktivnost DNaze, transkripcijskog regulatora te proteinske kinaze. Pokazano je da Nm23 proteini sudjeluju u nizu važnih bioloških funkcija u stanici od proliferacije, diferencijacije i razvoja, do transporta vezikulama i apoptoze. Cilj ovog rada bio je stvoriti sustav s utišanim izražajem nm23-H2 u stanicama CAL 27 (stanice karcinoma pločastog epitela jezika). Za utišavanje nm23-H2 korišten je plazmid retrovirusnog porijekla, pSHAG-MAGIC2. Plazmid nosi umetnutu sekvencu za shRNA, koja utišava nm23-H2. Vektor smo transfecirali u stanice CAL 27 kako bismo dobili stabilne transfektante sa smanjenim izražajem Nm23-H2. Pozitivne klonove odabrali smo na temelju otpornosti na puromicin. Učinkovitost utišavanja odgovarajućih transfektanata provjerili smo metodom Western blot.

nm23-H2; lipofection; gene silencing; shRNA

nije evidentirano