hrvatski

Kinetička karakterizacija peptidaza pomoću kapilarne elektroforeze

Dipeptidil-peptidaza III (DPP III) je cink-ovisna egzopeptidaza potencijalno uključena u modulaciju boli kod sisavaca. Istraživanje u okviru ovog magistarskog rada je pokazalo hidrolitičku aktivnost pročišćene ljudske DPP III prema opioidnim peptidima iz grupe enkefalina, endomorfina, hemorfina i egzorfina. Najjači afinitet enzim je ispoljio za heptapeptid valorfin (Ki = 0, 05 μmol L-1). Za kinetičku karakterizaciju aktivnosti DPP III prema Leu- enkefalinu (Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu, Ki = 3, 65 μmol L-1), tetrapeptidu Tyr-Gly-Gly-Phe (Ki = 4, 00 μmol L-1) i endomorfinu-1 (Tyr-Pro-Trp-Phe-NH2, Ki = 5, 00 μmol L-1) razvijene su vrlo osjetljive metode kapilarne elektroforeze (CE) kojima su separirani i kvantitativno određeni produkti enzimske hidrolize ovih peptida, što je omogućilo izračunavanje vrijednosti Km i kcat. Metoda CE primijenjena je i za kinetičku karakterizaciju dipeptidil-peptidaze IV (DPP IV) pročišćene iz štakorskog bubrega. Ustanovljeno je da ovaj enzim hidrolizira endomorfin-1 na isti način, odcjepljujući Tyr-Pro s N-kraja, i usporedivom efikasnošću kao ljudska DPP III.

dipeptidil-peptidaza ; endomorfin-1 ; kapilarna elektroforeza ; opioidni peptidi

Magistarski rad (po starom sustavu)