hrvatski

Neribosomske peptid-sintetaze: Utjecaj očuvanih regija adenilacijske domene na strukturna i funkcionalna obilježja tirocidin-sintetaze 1

Neribosomske peptid-sintetaze (NRPS) veliki su multifunkcionalni proteini koji nizom usklađenih enzimskih reakcija kataliziraju sintezu peptidnog produkta. Mnogi farmakološki važni peptidi prirodni su spojevi sintetizirani na ovaj način. Prvi korak u biosintezi neribosomski sintetiziranih peptida odabir je i aktivacija aminokiselinskog supstrata od strane adenilacijske (A) domene. A-domena sadrži 10 očuvanih regija (A1-A10), a uloga nekih od njih nije u potpunosti razjašnjena. U radu je ispitana supstratna specifičnost i stabilnost aminoacil-adenilata kod A-domene tirocidin-sintetaze 1 (TycA). Aktivnost divljeg tipa TycA u prisustvu pripadajućeg (L-Phe) i nepripadajućih supstrata, upućuje na brži gubitak adenilata nepripadajućih supstrata iz aktivnog mjesta. Za enzime s mutacijom Lys186 iz motiva A3 i Arg417 iz motiva A8 TycA, zabilježen je ubrzani gubitak adenilata pripadajućeg supstrata kao i izraženija ATPazna aktivnost, što ukazuje na narušenu strukturu aktivnog mjesta. Analiza relativnog položaja motiva A9 u odnosu na aktivno mjesto enzima u adenilacijskoj i tiolacijskoj konformaciji proteina, upućuje na njegovu moguću uključenost u drugi korak reakcije tijekom kojeg dolazi do prijenosa aminoacila na pripadajuću T-domenu. Pojedinačne aminokiselinske zamjene u regiji A9 TycA nisu imale značajan utjecaj na odvijanje prvog koraka reakcije (nastanak aminoacil-adenilata), izuzev mutacija očuvanog Pro490, što se može objasniti njihovim utjecajem na pravilno strukturiranje proteina. Razlike u enzimskoj aktivnosti zabilježene kod mutanti motiva A9 u prisustvu CoA, te naglašeno stimulativno djelovanje na potrošnju ATP kod enzima s mutacijom S491R, ukazuju na moguću ulogu motiva A9 u drugom koraku reakcije.

adenilacijska domena ; neribosomske peptid-sintetaze ; očuvani motiv ; tirocidin-sintetaza 1

nije evidentirano