hrvatski

Enzim purinska nukleozidna fosforilaza iz bakterije Escherichia coli: katalitički mehanizam i analiza strukture

Biološki aktivni oblik purinske nukleozidne fosforilaze (PNPaze) iz bakterije Escherichia coli je homoheksamer koji se može opisati kao trimer dimera. Pripremljeni mutanti: Arg24Ala, Asp204Ala, Asp204Asn, Arg217Ala i Asp204Ala/Arg217Ala poslužili su u istraživanju katalitičkog mehanizma izučavanog enzima. Analiza specifične aktivnosti svih mutanata prema adenozinu, inozinu, gvanozinu i N(7)-metil-gvanozinu potvrđuje da mehanizam uključuje prijenos protona na N-7 položaj purinske baze putem bočnog ogranka Asp204. Kinetika enzimske reakcije i analiza kristalnih struktura kompleksa PNPaze s fosfatnim/sulfatnim ionom pokazuju da konformacijska promjena aktivnog mjesta monomera u dimeru je bitan čimbenik u procesu katalize. Ta je promjena isključivo rezultat vezanja ortofosfata. Značajnu ulogu pritom ima Arg24, jer njegovom mutacijom u alanin ne dolazi do konformacijske promjene, a razina kooperativnosti podjedinica značajno se smanjuje. Asp204 i Arg217 ne utiču na konformacijsku promjenu, međutim, imaju neposrednu ulogu u regulaciji razine kooperativnosti.

purinska nukleozidna fosforilaza; aktivno mjesto; konformacijska promjena; kooperativnost

nije evidentirano