Biokemijska i strukturna karakterizacija dipeptidil- peptidaze III iz kvasca Saccharomyces cerevisiae (CROSBI ID 363983)
Ocjenski rad | doktorska disertacija
Podaci o odgovornosti
Jajčanin Jozić, Nina
Abramić, Marija
hrvatski
Biokemijska i strukturna karakterizacija dipeptidil- peptidaze III iz kvasca Saccharomyces cerevisiae
Dipeptidil-peptidaze III (DPP III) su enzimi uključeni u intracelularni katabolizam proteina, a čine zasebnu porodicu cink-metalopeptidaza (M49). Njihov katalitički mehanizam i strukturna svojstva još su nedovoljno istraženi. Sve DPP III inhibirane su tiolnim reagensima. S ciljem doprinosa poznavanju katalitičkih svojstava i prostorne građe metalopeptidaza porodice M49, kloniran je i prekomjerno eksprimiran gen za DPP III kvasca Saccharomyces cerevisiae, a protein pročišćen i biokemijski okarakteriziran. Nadalje, ciljanom mutagenezom pojedinačno je zamijenjeno svih 5 ostataka cisteina, te 7 evolucijski visoko očuvanih aminokiselinskih ostataka. Usporedbom katalitičkih svojstava ''divljeg tipa'' i mutiranih proteina ustanovljeno je da su Cys639 i Cys518 odgovorni za inhibiciju sulfhidrilnim reagensima, a Cys130 za dimerizaciju enzima. U vezanju peptidnog supstrata sudjeluju Glu461, Asp381 i Arg582, dok Tyr327 i His578 doprinose stabilizaciji prijelaznog stanja. Najveći pad katalitičke efikasnosti (kcat/Km), od čak 25 000 puta, uočen je za mutant E461Q, što ukazuje na esencijalnu ulogu Glu461 u katalitičkom mehanizmu. Kroz interdisciplinarnu suradnju, mutant C130S je kristaliziran i razjašnjena mu je 3-D struktura.
dipeptidil-peptidaza III ; porodica M49 ; Saccharomyces cerevisiae ; reaktivni cisteinski ostaci ; usmjerena mutageneza
nije evidentirano
engleski
Biochemical and structural characterization of dipeptidyl-peptidase III from yeast Saccharomyces cerevisiae
nije evidentirano
dipeptidyl-peptidase III ; M49 family ; Saccharomyces cerevisiae ; reactive cysteine residues ; site-directed mutagenesis
nije evidentirano
Podaci o izdanju
128 + XII
11.04.2011.
obranjeno
Podaci o ustanovi koja je dodijelila akademski stupanj
Prirodoslovno-matematički fakultet, Zagreb
Zagreb