hrvatski

Učestalost reprodukcijskih poremećaja u svinja uzrokovanih virusom reprodukcijskog i respiratornog sindroma svinja i cirkovirusom svinja tip 2

U cilju rasvijetljavanja proširenosti i učestalosti reprodukcijskih poremećaja uzrokovanih cirkovirusom svinja tip 2 (CVS2) i virusom reprodukcijskog i respiratornog sindroma svinja (RRSS) u osam svinjogojskih uzgoja u kontinentalnoj Hrvatskoj uzorkovano je ukupno 150 pobaćenih plodova i živo oprasene prasadi. Nakon patoanatomske pretrage 150 lešina napravljena je selekcija uzoraka, nakon koje su organi 83 plodova i prasadi podvrgnuti daljnjim dijagnostičkim postupcima. Preostalih 67 plodova i prasadi je zbog autolitičnih promjena ili drugih morfoloških nalaza koja se ne povezuju s reprodukcijskim poremećajima, izuzeti iz daljeg istraživanja. Od odabrane prasadi su uzorkovana tkiva i fiksirana u 10% puferiranom formalinu za histopatološku, imunohistokemijsku (IHC) i pretragu metodom hibridizacije in situ (ISH). Za pretragu metodom lančane polimeraze (PCR) materijal je pohranjen na -18°C. Svi uzorkovani organi podvrgnuti su histopatološkoj pretrazi. Za dokaz dijela genoma virusa RRSS-a korišten je Nested RT-PCR i Q-RT-PCR, dok su za izdvajanje DNA CVS2 korišteni različiti komercijalni kompleti i konvencionalni PCR. Za IHC dokaz virusa RRSS-a korištena su tri mišja monoklonska protutjela, a za dokazivanje CVS2 IHC-om jedno mišje monklonsko protutijelo. U svim slučajevima je korišten peroksidazni test s obilježenim polimerom. ISH za dokazivanje CVS2 je provedena s oligonukleotidnom probom dužine 41 baze, obilježenom s digoksigeninom. PCR umnožci dobiveni nakon pretrage PCR-om od oba virusa su sekvencirani te je napravljeno filogenetsko stablo. Statistički značajne razlike su utvrđene χ2 testom. Potvrđena je znaćajna učestalost reprodukcijskih poremećaja uzrokovanih virusom RRSS-a u Hrvatskoj. Ukupno je 22 (26, 51%) mrtvo ili živo oprasena praseta bilo pozitivno barem jednom metodom, dok je 61 (73, 49%) bilo negativno na prisutnost virusa. Reprodukcijski poremećaji uzrokovani virusom RRSS-a utvrđeni su na 5 od 8 pretražanih farmi. Nested RT PCR-om je u 7, 23% uzoraka utvrđena pristunost virusa RRSS-a, dok je imunohistokemijski pozitivan nalaz utvrđen u 19 (23, 89%) timusa. Viralni antigen virusa RRSS-a utvrđen je u meduli i korteksu timusa, u citoplazmi timocita (monocita) i u Hasselovim tjelešcima. Prema rezultatima IHC-a u svim slučajevima radilo o europskom tipu virusa, što je kompatibilno rezultatima sekvenciranja. Odabir organa se pokazao presudan za učinkovito dokazivanje virusa RRSS-a u fetusima i neonatalnoj prasadi. Karakterističan patomorfološki nalaz na fetusima inficiranim virusom RRSS-a je difuzni potkožni edem, segmentalna i difuzna krvarenja pupkovine, a pokadkad i po parenhimu pluća, punokrvnost jetre i limfocitarni hepatitis. Segmentalna krvarenja i opsežani edem pupkovine, krvarenja po korteksu bubrega, limfocitarni hepatitis i punokrvnost jetre smatramo visoko specifičnim patomorfološkim promjenama uzrokovanim virusom RRSS-a. Specifične patomorfološke promjene upotpunjene epizootiološkim podacima i kliničkom slikom mogu se koristiti kao snažan argument o postojanju reprodukcijskih poremećaja uzrokovanih virusom RRSS-a. U našem istraživanju specifične patomorfološke promjene kompatibilne s infekcijom virusa RRSS-a ustanovljene su u 51, 51% pobaćene, mrtvo i živo oprasene prasadi te nisu utvrđene specifične patomorfološke promjene kompatibilne s nalazom kod reprodukcijskih poremećaja uzrokovanih CVS2. Objim visoko specifičnim dijagnostičkim metodama molekularne patologije IHC i ISH polućen je negativan rezultat na CVS2. Izostanak specifičnih patomorfoloških promjena na miokardu plodova i prasadi, unatoč činjenice da je metodom PCR-a u svim uzorcima potvrđena prisutnost CVS2, što zbog njegove ubikviternosti nije bilo neočekivano, zaključili smo da u promatranim svinjogojskim uzgojima u Hrvatskoj CVS2 nije uzrok reprodukcijskih poremećaja. Sekvenciranjem dobivenih izolata CVS2 utvrđeno je njihova različitost ali i srodnost i pripadnost istom klasteru čime je iskljuljučena mogućnost kros reakcije ili kros kontaminacije tijekom samog dijagnostičkog postupka

reprodukcijski poremećaji; CVS2; virus RRSS-a; PCR; IHC; ISH

nije evidentirano