hrvatski

Konstrukcija standardne RNA i automatska kvantifikacija virusa hepatitisa C

Procjenjuje se da je približno 3 % svjetske populacije inficirano virusom hepatitisa C (HCV), što znači da je više od 170 milijuna kroničnih nosilaca tog virusa. HCV je glavni uzročnik posttransfuzijskog ne-A, ne-B hepatitisa; zajedno s virusom stečene imunodeficijencije u ljudi (HIV), najopasniji je među virusima čiji je prijenos moguć ljudskom krvi. Kloniranje genoma HCV-a pokazalo je da virus hepatitisa C ima genom u obliku pozitivne jednolančane RNA te je omogućilo značajan napredak u razumijevanju molekularne biologije tog virusa. To je doprinijelo razvoju novih spoznaja koje omogućavaju brže otkrivanje virusa. U ovome radu istražio sam pouzdanu i brzu detekciju ovog virusa. Usporedbom triju metoda za izolaciju ukupne RNA iz plazme, dokazao sam visoku efikasnost modificirane klasične metode. Za kvalitativno određivanje HCV-RNA uspostavio sam vlastitu osjetljivu, specifičnu i reproducibilnu metodu dvostupanjske lančane reakcije polimerazom uz reverznu transkripciju (RT-PCR). Konstruirao sam dva nova stabilna interna RNA-standarda (HCVdel- i HCVins+) i dokazao njihovu svrsishodnost pri kvantitativnoj analizi uzoraka kompetitivnom dvostupanjskom RT-PCR. Sustav se pokazao pogodnim za kvantitativnu analizu uzoraka s niskim brojem kopija HCV-a. Pomoću RT-PCR za HCV-RNA, u pulovima (smjese plazmi više donatora) plazmi i primarnim kulturama leukocita dobrovoljnih davalaca, koji u svom serumu nisu sadržavali anti-HCV antitijela, otkrio sam HCV-RNA+ uzorke u postotku sukladnom globalnoj prevalenciji HCV-a u pulovima plazmi. Prikazani rezultati potvrđuju nužnost kvalitativnog i kvantitativnog pretraživanja donacija ljudske krvi na HCV-RNA amplifikacijskim tehnikama jer se samo primjenom tehnologije amplifikacije nukleinskih kiselina, posebno za HCV i HIV, mogu infektivne donacije otkriti prije pojave antitijela u serumu.

HCV; standardna RNA; automatska kvantifikacija

nije evidentirano