engleski

Validatio of high resolution luiquid chromatography with mass detection LC-MS/MS) for determination of chloramphenilol in muscle tissue

Kloramfenikol je antibiotik širokog spektra koji se u veterinarskoj medicini koristi za liječenje različitih infekcija. Zbog dokazane toksičnosti, Europska Unija je zabranila primjenu kloramfenikola u životinja čiji proizvodi su namijenjeni ljudskoj uporabi. U ovom radu opisana je primjena brze i jednostavne metode tekućinske kromatografije visoke djelotvornosti s masenom detekcijom (LC-MS/MS) za određivanje i potvrđivanje kloramfenikola u mišićnom tkivu na razini koja odgovara minimalno zahtjevanoj granici učinkovitosti izvedbe metode koju je Europska Unija postavila za ovu supstancu. Validacija metode provedena je prema kriterijima za potvrdne metode prema odluci EU 2002/657. U tu svrhu određeni su sljedeći parametri: specifičnost, preciznost, linearnost, unutarlaboratorijska reproducibilnost i robusnost metoda. Nakon dodatka kloramfenikol-d5 kao internog standarda, uzorci mišića su ekstrahirani mješavinom aceton/diklormetan u prisustvu natrij klorida i natrij sulfata te pročišćeni na SPE C18 kolonicama. Kromatografsko odjeljivanje provedeno je na Zorbax XDB C18 koloni gradijentalnom elucijom koristeći mobilnu fazu koja je sadržavala mješavinu amonij acetata i metanola. Primjenom MRM postupka u negativnom ionizacijskom modu, tranzicije 321→257, 321→152 i 326→157 su korištene za kvantifikaciju i potvrđivanje molekula. Dobivene vrijednosti granične koncentracije analita i sposobnosti detekcije metode bile su manje od postavljene MRPL vrijednosti (ccα=0.19 μg/kg i ccβ=0.22 μg/kg). Vrijednosti iskorištenja metode kretale su se od 95.2 % do 108.7 % s pripadajućim interlaboratorijskim koeficijentom varijacije rezultata manjim od 10.9 %. Izvedbene karakteristike metode pokazuju da je razvijena metoda prikladna za kvantitativnu analizu i potvrđivanje kloramfenikola u mišićnom tkivu u skladu s trenutnim zahtjevima Europske Unije.

LC-MS/MS; chloramphenicol; muscle; solid-phase extraction

nije evidentirano