hrvatski

Pročišćavanje i djelomična karakterizacija rekombinantne ljudske dipeptidil-peptidaze III

Ljudska dipeptidil-peptidaza III (DPP III), član porodice metalopeptidaza M49, enzim je s ulogom u intracelularnom katabolizmu proteina. S ciljem istraživanja uloge visoko sačuvanog ostatka Asn406, u ovom diplomskom radu su proizvedeni divlji tip DPP III i mutirani oblik N406S prekomjernom ekspresijom u bakteriji Escherichia coli transformiranoj plazmidom koji je sadržavao cDNA za ljudsku DPP III s privjeskom od 6 His. Nakon pročišćavanja afinitetnom kromatografijom, rekombinantnim proteinima je određena molekulska masa (81 kDa) SDS-elektroforezom, specifična aktivnost za hidrolizu kromogenog supstrata Arg-Arg-2-naftilamida (37, 81 jmg-1 za divlji tip, 14, 52 jmg-1 za mutant N406S), optimalni pH (8, 6) i temperatura djelovanja (37 °C), te temperaturna stabilnost (do 37 °C za divlji tip, do 30 °C za N406S). Ustanovljena je inhibicija obaju enzimskih oblika kelatorima metala i sulfhidrilnim reagensom p-hidroksimerkuribenzoatom, te selektivnost za supstrat Arg-Arg-2-naftilamid. Rezultati ukazuju na važnost Asn406 za postizanje pune katalitičke aktivnosti i za termičku stabilnost ljudske DPP III.

dipeptidil-peptidaza III ; porodica M49 ; metalopeptidaza

nije evidentirano