hrvatski

Uloga proteina TLP40 i TROL u regulatornim mehanizmima oksigene fotosinteze

U ovom radu istraživana je uloga proteina TLP40 i TROL u mehanizmima oksigene fotosinteze. Gen koji kodira CYP38 (cyclophilin like protein) protein, ortolog gen za TLP40 iz špinata (Spinacia oleracea), lociran je na 3. kromosomu biljke Arobidopsis thaliana (L.) Heynh. Protein smješten u lumenu tilakoida, posjeduje peptidil-prolil cis-trans izomeraznu aktivnost te vrđi utjecaj na defosforilaciju ključnih proteina fotosustava II. U vrhu karakterizacije ovih mehanizama in vivo, lančanom reakcijom polimerazom analizirana je ugradnja regije T-DNA u gen koji kodira CYP38. Promjene u ultrastrukturi kloroplasta CYP38 biljaka utvrđene su promjenom elektronskog mikroskopa, dok je fluorescencija klorofila mjerena in vivo MINI-PAM prijenosnim fluorometrom. Kvantitativna mjerenja fotosintetskih prijelaza između stanja 1 i 2 CYP38 biljaka, mjerena su primjenom fluorometra s 101-ED (emitter-detector) jedinico. Opsežna istraživanja i karakterizacija funkcije proteina CYP38, među ostalim uključivala su i tehniku utišavanja gena At3g01480. «Gateway» metodom klorniran je aminoterminalni dio gena At3g01480 u ciljni vektor pH7WG2, 0 te je dobiveni kontrukt ugrađen u genom biljke A. thaliana (etotip Columbia). Transformacija biljaka divljeg tipa provedena je primjenom metode floral-dip posredstvom bakterije Agrobacterium tumefaciens soj EHA105. Daljnja istraživanja temeljit će se na )1) utvrđivanju uloge leucinskog zatvarača proteina CYP38 te uslijed slabe vijabilnosti sjemenki CYP38 nul-mutanti na (ii) istraživanju funkcije proteina uslijed pojačane ekspresije gena At3g01480 tehnikom sense RNA. Prilikom utvrđivanja funkcionalne uloge regulatornog gena At4g01050 oksigene fotosinteze koji kodira protein TROL (thylakoid rhodanase like protein), primjenjena je tehnologija «Affymetrix» ATH1 mikročipova u svrhu analize razine ekspresije gena u viljaka nul-mutanti ii SAIL_27_B04 u odnosu na divlji-tip biljke A. thaliana. Inducirana ekspresija gena At5g11670 (NADP-ME2) i At4g27440 PORB), provjerene su metodom obrnutog prepisivanja lančanom reakcijom polimerazom (RT-PCR) te lančanom reakcijom polimerazom u stvarnom vremenu (qRT-PCR).

biljka A. thaliana; TLP40; TROL; fotosinteza; “Gateway” tehnologija; “Affymetrix”; RT-PCR

nije evidentirano