hrvatski

Morfometrija i statička DNA citometrija makrofaga u bronhoalveolarnom ispirku bolesnika sa sarkoidozom

Bronhoalveolarno ispiranje (BAL) važna je metoda u dijagnostici i praćenju sarkoidoze. Akutni i kronični pojavni oblik sarkoidoze razlikuju se prema kliničkim pokazateljima i tijeku bolesti. Rutinskim pregledom svjetlosnim mikroskopom jezgre makrofaga u citocentrifugatima BAL-a bolesnika sa sarkoidozom različitog su oblika i veličine, od okruglastih do ovalnih, udubljenih i izduženih, rjeđe ih je više unutar jedne stanice, različite su strukture kromatina. U ovom radu ispitivani su morfometrijski parametri jezgara makrofaga i karakteristike jezgara makrofaga statičkom DNA citometrijom u bronhoalveolarnom ispirku bolesnika sa sarkodozom akutnog i kroničnog oblika i njihovo dijagnostičko i kliničko značenje. Ispitivani parametri jezgara makrofaga su jednostavni morfometrijski parametri: površina, opseg, konveksnost, duljina, debljina, najveći polumjer, najmanji polumjer ; složeni morfometrijski parametri: faktor oblika (FF), faktor izduženosti (FF izd) i površina/konveksnost (ACA) ; te DNA indeks (DI), postoci stanica prije vrha histograma, u vrhu, poslije vrha, u S-fazi i G2M fazi DNA histograma jezgara. U ispitivanje su uključena 73 ispitanika podijeljena u 4 skupine: bolesnici sa sarkoidozom akutnog oblika (n=16), sarkoidozom kroničnog oblika (n=17), intersticijskom bolesti pluća koja nije sarkoidoza (n=30), te ispitanici bez plućne bolesti (n=10). U bronhoalveolarnim ispirku utvrđene su statistički značajne razlike među skupinama ispitanika u svim varijablama morfometrijskih parametara površina, opseg, konveksitet, dužina i najveći polumjer jezgara makrofaga (p<0, 05). Statistički značajne razlike među skupinama (p<0, 05) utvrđene su također u varijablama Max i SD najmanjeg polumjera jezgara, Max, Min i SD debljine jezgara, Pr, Max, Min i SD omjera površine i konveksnosti jezgara, Max i Min faktora oblika (FF), Pr, Med, Max i i SD faktora izduženosti (FF izd), te u denzitometrijskom određivanju DNA sadržaja jezgara makrofaga - postotku jezgara u S-fazi staničnog ciklusa, te u DNA indeksu (DI) određenom metodom po VanVelthovenu. Nisu nađene statistički značajne razlike među skupinama u varijablama parametara: najmanji polumjer, (Pr, Med, Min) ; omjera površine i konveksnosti – ACA (Med) ; u debljini jezgara (Pr i Med) ; faktoru oblika -FF (Pr, Med, SD) ; faktoru izduženosti - FF izd (Min) ; te u denzitometrijskom određivanju DNA sadržaja jezgara makrofaga: postotak jezgara prije vrška u histogramu, postotak jezgara u vršku histograma, postotak jezgara poslije vrška u histogramu, postotak stanica u G2M fazi u denzitometrijskom histogramu. Utvrđene su statistički značajne razlike u postotku stanica u S-fazi staničnog ciklusa među skupinama bolesnika sa akutnom i kroničnom sarkoidozom (p<0, 05). Skupinu bolesnika sa sarkoidozom akutnog oblika morfometrijski karakteriziraju velike, pretežno ovalne, uniformne jezgre makrofaga u bronhoalveolarnom ispirku. Jezgre ovih stanica su ne-diploidnih karakteristika, sa statistički značajno većom proliferativnom aktivnošću, ali smanjenom apoptotičkom aktivnošću. Skupina bolesnika sa sarkoidozom kroničnog oblika obilježena je najvećom polimorfijom jezgara makrofaga, s nalazom elipsoidnih, izduženih jezgara. Jezgre stanica su ne-diploidnih karakteristika, proliferativna aktivnost je statistički značajno manja, ali još uvijek viša od granične vrijednosti, a apototička aktivnost smanjena. Multivarijatnom diskriminativnom analizom uz korištenje stupnjevitog eliminiranja varijabli modelirani su skupovi varijabli koji omogućuju razlikovni kriterij za dijagnozu akutne odnosno kronične sarkoidoze u odnosu na kontrolnu, odnosno skupinu bolesnika s intersticijskom bolesti pluća koja nije sarkoidoza. Na taj način izdvojena su 43 parametara koji omogućuju potpuno razlikovanje (100%) makrofaga ispitanika pojedinih skupina bolesti, uključujući i razlikovanje skupina ispitanika sa akutnom i kroničnom sarkoidozom. Na osnovu izračuna diskiminativne analize dobivene su klasifikacijske funkcije koje na osnovu izmjerenih vrijednosti pojedinih morfometrijskih parametra svrstavaju populaciju jezgara makrofaga bronhoalveolanih ispiraka u određenu skupinu bolesnika sa bolestima plućnog intersticija: sarkoidozu akutnog oblika, sarkoidozu kroničnog oblika i skupinu bolesti plućnog intersticija koja nije sarkoidoza.

Morfometrija; makrofagi; BAL; sarkoidoza

nije evidentirano