hrvatski

Metalopeptidaze porodice M49: heterologna ekspresija, pročišćavanje i karakterizacija ljudskog ortolognog enzima

Humana dipeptidil-peptidaza III (DPP III), član porodice metalopeptidaza M49, je enzim s ulogom u modulaciji boli i obrani od oksidativnog stresa. U cilju boljeg razumijevanja katalitičkog mehanizma humane DPP III i ostalih članova porodice M49, cDNA za taj protein je eksprimirana u bakteriji. Određivanje biokemijskih svojstava rekombinantnog proteina pokazalo je da se ne razlikuje od DPP III iz ljudskih eritrocita. Bioinformatičkom analizom uočeno je 5 sačuvanih regija u primarnoj strukturi peptidaza M49, a ciljanom mutagenezom priređeno 11 mutiranih oblika humane DPP III (zamijenjeno je 8 jako očuvanih aminokiselinskih ostataka). Analizom enzimskih svojstava mutiranih proteina ustanovljeno je da je Tyr318 uključen u stabilizaciju prijelaznog stanja, da Trp359 doprinosi termičkoj stabilnosti, a Trp300 sudjeluje u održavanju funkcionalnog integriteta podmjesta S2. Najveći pad (> 1900 puta) katalitičke efikasnosti (kcat/Km) uočen je za mutant H568N. Dobiveni rezultati ukazuju da je His568 uključen u stabilizaciju prijelaznog stanja enzimske reakcije stvaranjem jake vodikove veze.

porodica M49 ; metalopeptidaze ; dipeptidil-peptidaza III ; ciljana mutageneza

nije evidentirano