hrvatski

Uloga proteina Rac1A u regulaciji dinamike citoskeleta protista Dictyostelium discoideum

Protein Rac1A je mala monomerna GTPaza koja spada u obitelj Ras proteina. U aktivnom obliku veže efektorne molekule i sudjeluje u prijenosu signala od površinskih receptora do aktinskog citoskeleta. Do sada je pokazana interakcija Rac1A s DGAP1, proteinom srodnim IQGAP proteinu sisavaca, koji tvori kortikalni kompleks s heterodimerom korteksilina. Ovaj kompleks je lokaliziran u stražnjem dijelu stanica tijekom kretanja i u diobenoj brazdi mitotskih stanica, te se pretpostavlja da igra važnu ulogu u staničnoj diobi. S ciljem praćenja dinamike Rac1A u živim stanicama odlučili smo konstruirati fluorescentnu probu za aktivni oblik ovog proteina. Regulatornu domenu štakorske kinaze Pak1 fuzionirali smo s žutim fluorescentnim proteinom, a sustavom dva hibrida u kvascu i afinitetnim pročišćavanjem pomoću glutation-sefaroze pokazali smo interakciju ove probe s Rac1A. U nepokretnim vegetativnim stanicama, GBD-YFP proba bila je lokalizirana posvuda u staničnom korteksu, dok se je tijekom kretanja nalazila na prednjem kraju stanice. Također je bila lokalizirana u endocitotskim čašicama, ali nije bila prisutna u diobenoj brazdi tijekom citokineze. Kako raspodjela naše probe ne odgovara raspodjeli GFP-DGAP1 i GFP-korteksilina, predlažemo dvojaku ulogu Rac1A u regulaciji aktinskog citoskeleta u stanicama Dictyostelium. Dok Rac1A pozitivno regulira procese ovisne o de novo polimerizaciji aktina, taj protein vjerojatno djeluje kao negativni regulator kompleksa DGAP1 i korteksilina.

ras; rho; GTPaza; aktin; citoskelet; Dictyostelium

nije evidentirano